链霉菌基因转移的方法

《链霉菌基因转移的方法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、维普资讯http://www.cqvip.com一技术与方法§％世％链霉菌基因转移的方法吴胜夏焕章(沈阳药科大学生物制药系．沈用111~)16)摘要本文介绍了用于链霉茼基因转移的各种方法，涉厦原生质体转化、电穿孔、接合转移和噬茵体转导，对影响链霉茼基因转移的各种因素进行了分析。关t词链霉茼原生质体转化电穿孔接合转移噬茼体转导链霉菌是一类重要的工业微生物，它可以产生种链霉菌。到目前为止该方法仍然是链霉菌转各种各样的生物活性物质，越来越受到重视，链霉菌化和转染的基础。基因工程技术的发展，使得克隆次级代谢产物生物影响原生质体转化的主要因素

2、有原生质体的制合成基因、有目的地定向改造基因、提高基因的表达备和再生的条件、转化时所用原生质体的数目、质粒水平以改造菌种的生产能力、基因重组产生新化合的来源和浓度、再生平板的干燥程度、PEG的来源和物成为可能。在对一个链霉菌进行基因改造时，首浓度、抗生素选择时间等。在进行转化实验之前，首要的问题就是建立所研究菌株的基因转移系统，这先要制备原生质体，要求原生质体有较高的形成率是实现对其基因功能分析、生物合成基因簇定位、基和再生率。据文献报道不同链霉菌原生质体形成和因改造等一系列工作的基础。然而，有许多链霉菌，再生的条件不完全相同，需要

3、根据不同菌种的性质尤其是有实用价值的链霉菌在进行DNA转化时，均加以改进。另外，链霉菌对外源DNA普遍存在限制遇到很大困难。为克服这一困难，科研人员进行许修饰作用，这也是影响转化成败的一个关键性因素。多研究。通过分离内源性质粒、筛选噬菌体并通过除少数链霉菌如变铅青链霉菌(S．1ividar~)和生二改造其结构而构建了许多有用的克隆载体。在方法紊链霉菌(S．om州ns)等对外豫DNA无限制修学上也进行了许多有益的掇索，建立了几种基因转饰作用外，其它的链霉菌都表现出程度不同的限制移方法如转化、转导和接台转移等。下面对这些方修饰作用。如除

4、虫链霉菌(S．avernut／／／s)中存在一法在链霉菌中应用逐一进行介绍。种独特的甲基化专一性的限制修饰系统：S．]ipma—nij表达两种限制修饰系统；而弗氏链霉菌(S．舡一l转化也)中存在五种限制修饰系统等。链霉菌对外源包括PEG一介导的质粒转化原生质体(p0lvetlI．DNA的限制修饰作用可由以下几个因素中的一个yleneglycol—·inducedplasmidtransfornmtionofproto—或几个共同决定：质粒的不相容性、DNase活力、限plasts)和电穿孔(e]ectroporstion)。前者是链

5、霉菌基制性内切酶。因操作中最常用的方法，后者主要用于植物和动物1．1．1质粒的不相容性细胞，在链霉菌中也有成功的报道。质粒的不相容性主要由两个方面的因素引起1．1PEG一介导的质粒转化原生质体的：①由于复翩控翩而产生的不相容性。复翩控制转化大肠杆菌的关键是用冷刺激和c且cL处理系统不能将它们作为两个质粒来识别，因而只能随诱导感受态细胞，由此形成通过质粒中介的克隆操机选择进行复翩；②由于分离引起的不相容性。如作，但这在链霉菌中尚无成功的报道。在Okanishi果两个质粒具有相同的par功能，这两个质粒有可和他的合作者有关链霉菌原生质体

6、形成、再生和转能是不亲和的。当共存的质粒具有相同的par功能染工作的基础上，Bibb等发现当有PEG存在时，质时，在细胞分裂时只有一种能够被分配到子细胞。粒DNA能以很高的频率转化变铅青链霉菌原生质然而，有时一个子细胞只能得到一种类型的质粒，而体⋯。通过对影响转化过程的各个参数的优化以及另一个细胞得到另外一种类型的质粒，这样得到的对转化方法的改进，这一方法已成功地应用于许多子细胞都是丢失一种质粒的细胞。在极端的情况91维普资讯http://www.cqvip.com下，一个质粒的存在完全阻止另一个质粒的复制，因gensu10—22)

7、中，但来自弗氏链霉菌ATCC10745的而无法建立异源的质粒系统。在链霉菌中已发现许pU702，却可以低频转化lO一22原生质体。原因可多内源性质粒，有线状和环状之分，大小也相差很悬能是弗氏链霉菌ATCC10745和吸水链霉菌应城变殊，小的有几千个碱基对，大的有几十万个碱基对。种l0—22之间存在相同修饰DNA的机制，因而通从变铅青链霉菌中分离到的内源性质粒pU101是一过弗氏链霉菌对plJ702的修饰间接克服了吸水链霉个8．9kb的高拷贝质粒，由它衍生出的一系列质粒菌对pU702的限制性障碍。朱春宝等在研究天已成为链霉菌基因工程中

8、应用最广泛的克隆载体。蓝淡红链霉菌(s．eoeru／eorub／dus)的转化系统时发现但一些pU101的衍生质粒之间存在强的不相容性，pU702无法直接转化天蓝淡红链霉菌的野生株sI．无法在同一宿主中共存。有文献报道，某些链霉PI1