fmdv l蛋白真核表达质粒的构建及对ifn效应因子的影响

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1、万方数据—叫J』●·■●●J■-C0nStrUCtiontoreUKarV0nCeXpreSSlonplasmidofLproteinoffoot—and—mouthdiseaSevirusandits．imDactontheIFNcIlSeaSeVlrUSancIltS‘lmpaCt0ntnel■州effectorsThesissubmittedtolneSlSSUDmltteQtOQ乡叼缸D彻砒“厉乱磁厂U佗动P恕砂InFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMaster．ofAgronomyAuthor：LiuJiyu(De

2、partmentofAnimalScienceand1℃chnology)SuperVisor：Prof．ShanHuAssociateprofessor．DuYijunQingdao．C址naJWle．2013万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰一写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：亩1纵时间：加B年占月

3、蝴日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：争7爱丛时间：户房年石月>貊导师签名：时间：矽易年石月谚日万方数据青岛农业大学硕士论文摘要FMDVL蛋白真核表达质粒的构建及对IFN效应因子的影响摘要口蹄疫病毒在病毒学分类上属微核糖核酸病毒科、口蹄疫病毒属，已有研究发现口蹄疫疫苗免疫效果不好及病毒在易感

4、细胞乖易感动物体内快速复制，与口蹄疫病毒抑制宿主I型干扰素发挥效应进而抑制先天性免疫应答有关。研究证明L蛋白能够降解IRF．3／7以及抑制IFN．B的mRNA的转录从而抑制宿主I型IFN的产生；同时L蛋白还能够通过降解NF．1出的亚单位p65瓜elA来抑制NF。1cB信号通路，从而抑制宿主先天性免疫应答，但是，对于L蛋白是否影响IFN发挥效应的JAK．Sn汀信号通路没有相关的研究。本研究的第一部分根据口蹄疫病毒L蛋白的基因序列构建了能够表达口蹄疫病毒Lpro的重组真核表达质粒，通过PCR、双酶切、测序以及姒和w色stemB10t对构建的重组真核表达质粒的基因及蛋白进表达情

5、况进行验证。结果表明构建的真核表达质粒基因序列正确，且所表达出的目的蛋白主要分布在细胞质和核的周围，大小约为24KD。本研究第二部分根据GenBank中人的ISGl5、ISG56、Mxl、OAS、PI@和GAPDH基因序列，构建阳性重组质粒作为标准品模板用以建立SYBRGreenI荧光定量盯PCR的标准曲线和溶解曲线，并进行敏感性、特异性和重复性试验。对建立的实时荧光定量RT-PCR方法进行分析显示，所建立的方法灵敏度高、特异性强，重复性好，且所测目的基因标准品的cp值与标准品稀释度在1．×101～1×108copies／uL的范围内分别呈良好的线性关系，可以用于检测FM

6、DVL蛋白对I型IFN效应因子影响的试验中。本研究的第三部分中，在以GST和pⅥⅨ1为对照的情况下，研究了HeLa细胞在转染FMDVL蛋白真核表达质粒，并受到I型IFN刺激后ISGl5、ISG56、Mxl、OAS、PKR的相对表达量变化情况。结果表明，目的基因的相对表达量较转染空载体或GST的真核表达质粒明显降低。说明口蹄疫病毒L蛋白可以抑制干扰素通过JAK．SWJ信号通路发挥抗病毒活性。本研究的结论对FⅧV的感染和发病机制提供了一定的理论补充，也为研究F№VL蛋白抑制I型IFN发挥效应的信号通路特别是JAK．STAT信号通路的机理奠定了基础，并为预防和控制FMDV感染研

7、发口蹄疫病毒新型疫苗提供新的靶向分子。关键词：口蹄疫病毒；L蛋白；信号通路；效应因子万方数据青岛农业大学硕士论文Abs缸actC0nStrUCtlontoreUkarVOtlCeXpreSSlonDIaSmld0lL01一．●^●』●‘■●1一T—foot·and—mouthdiseaseVirusanditimpactontheIFNef．fectorsAbstractThecauS矗iveagent，FMDvinlS，belongstot11eAph吐10ViIusgenuSofmePicom“试daefaInjly．FM