不同转移潜能人大细胞肺癌细胞株基因表达谱变化的研究

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1、四川大学硕士学位论文不同转移潜能人大细胞肺癌细胞株基因表达谱变化的研究姓名：邱小明申请学位级别：硕士专业：外科学（胸外）指导教师：周清华20070520声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本学位论文成果是本人在四川大学读书期间在导师指导下在天津医科大学总医院天津市肺癌研究所完成的，论文成

2、果归四川大学和天津医科大学总医院天津市肺癌研究所成果所有，特此声明。申请人：研刁，明指导教师：。四川大学七年制学生学位论文硕士研究生：邱小明不同转移潜能人大细胞肺癌细胞株基因表达谱变化的研究★研究生邱小明导师周清华教授摘要背景与目的肺癌是当今世界上对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤，也是临床治疗疗效最差的恶性肿瘤。肺癌的侵袭和转移是导致肺癌病人治疗失败和死亡的首要原因，因此探讨肺癌侵袭转移的分子机制具有重要的理论意义和临床应用前景。而肺癌的侵袭和转移是极其复杂的多基因调控和多步骤发展过程，涉及肿瘤细胞、机体、靶组织的相互影响和作用，涉及一系列肿瘤相关基因的调

3、节和信号传导。对于这些数量庞大的基因，传统的研究方法(如Southernblot、Northernblot、RT-PCR等)有其局限性，只能研究一个或几个基因以及它们之间简单的调控关系，无法全面认识肺癌发生发展侵袭转移过程中各基因之间复杂的相互调控关系。而伴随着人类基因组计划的而发展起来的基因芯片(gcncchip／DNAmicroarray)技术，具有高通量、大规模、高灵敏性、高度自动化和重复性的特点，能同时检测整个肿瘤基因组的变化，使研究者能从基因组水平上系统、全面的分析肿瘤发生、发展、侵袭转移的分子机理。人大细胞肺癌细胞株NL9980和L9981是具有

4、相同的遗传学背景的同源细胞株，其中NL9980具有低转移性，‘本研究受国家自然科学基金重点项目(NO．30430300)和天津市科技支撑计划重点项目(No．06YFSZSF05300)资助。1不同转移潜能人大细胞肺癌细胞株基因表达谱变化的研究导师；周清华L9981具有高转移性，它们之间具有高度的可比性，是研究侵袭转移机制的良好模型，通过对细胞形态、生物学特性、表达基因及蛋白差异等比较，可以探讨其与侵袭、转移的关系和作用机制。本研究旨在使用基因芯片比较不同转移潜能的人大细胞肺癌同源细胞株NL9980和L9981的基因表达谱变化，初步探讨不同转移潜能的人大细胞肺

5、癌的基因表达特点及筛选转移相关基因，为肺癌的诊断、预后提供分子生物学指标，并从整个基因网络水平对肺癌的侵袭转移机制进行初步探讨。方法提取并纯化NL9980和L9981细胞的总RNA，以OligodTPrimer为引物反转录生成cDNA，然后经体外转录(ⅣT)生成标记有生物素的cRNA，纯化的cRNA片段化为35．200bp的小片段后与AffymetrixHGUl33Plus2．0芯片杂交，经洗涤染色扫描后得到两个细胞的表达谱。应用GCOS软件比较两个细胞株的差异探针，将得到的差异探针进行注释，分类，信号通路分析，从中筛选转移相关的基因和信号通路。结果1．通过

6、NL9980和L9981细胞株基因表达谱的对比发现两个细胞株的绝大部分的基因表达和分布非常相似，从而也证实了两个细胞株是遗传背景相同的同源细胞株。2．L9981细胞株与NL9980比较，从L9981细胞株中筛选到差异表达探针1274条。通过检索注释信息，找到有明确基因名称的基因970个，其中上调的基因有686个，下调的基因有283个，1个基因的两个不同转录本分别上调和下调。没有注释信息的探针90个，其中88个为Esl序列。3．文献挖掘发现970个有明确名称的基因中，686个基因在Pubmed有文献报道，与肺癌相关的基因有181个，与侵袭转移相关的基因有240

7、个。检索GRIF，970个基因中有明确基因功能报道的基因有518个，其中2四川大学七年制学生学位论文硕士研究生：邱小明肺癌相关的基因有17个，与侵袭转移相关的基因有49个，与血管生成相关的基因有22个，与细胞骨架相关的基因有10个，与细胞粘附相关的基因有56个，与癌基因相关的基因有32个，与凋亡相关的基因有98个。进行GO分类，改变的基因主要涉及到的功能分类为binding、catalyticactivity、signaltransduceractivity和transcriptionregulatoractivity。4．从差异基因中发现L9981细胞存在

8、u-PA、MTl-MMP、CXCR4及rotst的高