荧光探针法和疏水相互作用层析法分析蛋白表面疏水性

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1、⑧论文评阅人1：评阅人2：评阅人3：评阅人4：评阅人5：答辩委员会主席：委员1：委员2：委员3：委员4：委员5：叁至竖3麴援3逝江王些丕堂姚羞迳!教援3逝江太堂羞!睑堑!教援塑堑婆太堂盐丕强3教握3逝江太堂浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特另UDI：I以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝姿盘鲎或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的

2、说明并表示谢意。学位论文作者签名：畚、黝桧签字日期：2。7争年6月加日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝婆盘堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝至三太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)．彳f学位论文作者签名：杀晶樽导师签名：，l弋矽、＼、签字日期：加f争年莎月fD日签字日期：’l力lq年b月lo日浙江大学硕士学位论文致谢时光荏苒，转瞬间三年

3、的研究生生涯即将结束，这也意味着我要告别多年的校园生活，离开这座美丽的城市。静坐西湖畔，想到论文即将完成，内心有一丝兴奋，而忆及要离开实验室，心中则多了些许不舍。这三年间，我收获很多，成长很快，这都得益于师长、同学朋友和家人的帮助。特别感谢我的导师林东强教授。他不仅在学习和实验上给予指导，更在生活上提供无私的帮助。从硕士课题的选题、构思和文献搜集，到具体的实验实施、数据分析，以及论文的撰写，林老师都给予我极大的启发，为我的论文工作倾注了心血和汗水。在此期间，林老师渊博的学识和高尚的修养，使我钦佩不已，是我为人处事的楷模；林

4、老师严谨细致的作风和精益求精的精神，令我深受启迪，是今后工作中我所需要进一步培养的精神。正是林老师无私的帮助与热忱的鼓励，我的毕业论文才得以顺利完成。再次对林老师的悉心指导和辛勤付出表示最真诚的感谢。此外，感谢课题组其他老师的大力支持。姚善泾教授为我们的科研工作营造了良好的环境和条件，他以广博的知识和深厚的科学素养为我们树立了好榜样。关怡新教授作为德育导师，她的乐观开朗和幽默风趣不断为我们传递着正能量，同时在生活上给予我细心的关怀。梅乐和教授独到的见解和犀利的点评让我印象深刻。张其磊老师认真的治学态度和敏锐的思维也让我受益

5、颇多。感谢童红飞、卢慧丽、王荣柱、余金鹏、武强、杜巧燕、闫啸等师兄师姐对我的科研工作提出宝贵的建议，并在实际操作中给予指导。感谢赵伟睿师兄慷慨提供试剂，感谢吴庆喜、施伟、严军、陆涛、吴启赐、吕长江、沈煜斌、袁晓明、鲁丹萍、徐阳光、禚孝发、童芳丽、刘晓萌、马莹莹、刘晓晶、李菁、辛新等一起在实验室工作和学习的同学，以及室友李亭亭、孔芹、刘涪婧和王明霞在科研和生活中提供的帮助。谢谢你们陪我度过三年美好的时光，我会怀念和你们一起奋斗和生活的日子，祝愿各位实验顺利，前程似锦。感谢支持我的朋友，谢谢你们的支持和帮助。感谢默默支持我的家

6、人，你们的支持和关怀是我强有力的后盾，给予我奋斗的动力，今后我将继续努力。感谢浙江大学，感谢教导过我的老师和一起学习奋斗的同学。感谢国家自然科学基金和浙江省杰出青年科学基金的资助。致谢浙江大学硕士学位论文感谢所有帮助过我的老师、同学、朋友，感谢你们，祝愿你们在以后的日子里开心、快乐!II余晶梅2014年5月浙江大学硕士学位论文摘要蛋白表面疏水性是蛋白质的重要特性之一，对于维持蛋白质的稳定构象及生物活性有着重要作用，同时又是疏水作用为主的层析分离蛋白质方法的重要依据。了解蛋白质在不同条件下表面疏水特性的变化，有助于理解其结构

7、变化和生理活性，对于优化蛋白分离过程也有指导意义。本文利用荧光探针法和疏水相互作用层析(HIC)法，探究不同因素对蛋白表面疏水性的影响，得到一些规律性认识。主要结果如下：首先以8一苯氨基一l一萘磺酸铵盐(ANS)为荧光探针，优选了测定体系的pH值和ANS浓度，测定蛋白质的表面疏水性指数＆，考察了温度、盐、变性剂、辛酸钠(NaCA)等对牛血清白蛋白(BSA)、牛免疫球蛋白(blgG)So的影响。发现温度对BSA和bIgG表面疏水性的影响呈现相反的规律。不同盐对蛋白表面疏水性的影响与相关离子的Hofmeister序列位置相关，

8、稳液盐和中性盐存在时蛋白质的＆值大于离液盐条件下的岛值。BSA和blgG的表面疏水性受十二烷基磺酸钠(SDS)的影响存在较大差异。盐酸胍浓度升高。BSA的岛值明显减小。而bIgG的S0值先增大后减小。NaCA浓度提高，BsA的&值逐渐减小，而blgG的岛值则几乎没有变化。运用荧光光谱法进一步分析荧光探针