猪小肠上皮细胞miRNA对猪流行性腹泻病毒复制的影响及其分子机制的初步研究

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1、分类号密级UDC单位代码硕士学位论文猪小肠上皮细胞miRNA对猪流行性腹泻病毒复制的影响及其分子机制的初步研究研究生姓名张宸语指导教师温建新副教授刘光亮研究员学科专业预防兽医学研究方向猪肠道黏膜免疫学中国.青岛二0一八年六月PreliminaryStudyonEffectsandMechanismsofPorcineIntestinalEpithelialCellmiRNAonReplicationofPorcineEpidemicDiarrheaVirusThesissubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInF

2、ulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyZhangChenyu（CollegeofVeterinaryMedicine）Supervisor:WenJianxin,LiuGuangliangQingdao.ChinaJune,2018独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作

3、的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日青岛农业大学摘要猪小肠上皮细胞编码的miRNA对猪流行性腹泻病毒复制的影响及其分子机制的初步研究摘要猪流行性腹泻（

4、porcineepidemicdiarrhea，PED）能引起一周龄仔猪腹泻、呕吐、脱水乃至死亡的病毒性疾病。miRNA是一种长约22nt的非编码单链小RNA，它是由基因组中某个转座子编码。为探究猪流行性腹泻病毒（PEDV）感染猪小肠上皮细胞（intestineepithelialcellsJ2，IPEC-J2）后，对IPEC-J2miRNA表达谱的影响，本实验将PEDV感染IPEC-J2，收获细胞并提取总RNA，进行Hiseq高通量测序，构建了感染组与未感染组的miRNA表达谱并进行聚类分析、GO（Geneontology，GO）分析、KEGG（Kyo

5、toEncyclopediaofGenesandGenomes，KEGG）代谢通路分析和差异分析，并通过过表达novel-miR-877/311/604及ssc-miR-219amimic观察对PEDV在IPEC-J2中复制的影响,随后又对这些miRNA调控PEDV复制的分子机制进行初步探究。结果显示显著差异表达的已知miRNA有45个，显著差异表达的未知miRNA有249个，从其中随机挑选了差异较显著的16个miRNA使用qPCR进行验证，结果与测序结果一致；对这些miRNA测序结果进行GO分析，结果显示其广泛参与生物过程、细胞成分和分子功能的调节；通

6、过KEGG代谢通路分析显示miRNA也参与Jak-STAT、Toll样受体等信号通路的调节。还找到三个可以抑制PEDV复制的miRNA，分别为novel-miR-604、novel-miR-877和ssc-miR-219a，并对其作用机制进行了初步摸索，排除了这三个miRNA直接多用于病毒基因组、作用于细胞凋亡、细胞周期的影响，并找到了几个疑似的靶基因，如TGFβ1，TAP1，TP53BP2，NFTC2，DDX3X。目前国内外对PEDV的研究在感染致病机理、免疫机制等方面知之甚少，所以深入探究PEDV感染过程中的调控机制将极大地促进对该病的了解和防控，本

7、研究为认识miRNA在PEDV复制中起到的作用奠定了基础。关键词：IPECJ2；PEDV；miRNA；分子机制1青岛农业大学AbstractPreliminaryStudyonEffectsandMechanismsofPorcineIntestinalEpithelialCellmiRNAonReplicationofPorcineEpidemicDiarrheaVirusAbstractPorcineepidemicdiarrhea(PED)isaviraldiseases,whichcancauseaseriesofdiseasesinpiglet

8、sof1weeksuchasdiarrhea,vomiting,dehydrat