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《同时表达多种外源基因的非复制型重组痘苗病毒的构建》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、第15卷第1期病毒学报Vol.15No.11999年3月CHINESEJOURNALOFVIROLOGYMarch1999同时表达多种外源基因的非复制型重组痘苗病毒的构建马海伦孙朝晖陆柔剑娄元梅郭斐张帆阮力(中国预防医学科学院病毒学研究所,北京100052)摘要利用非复制型痘苗病毒载体,构建了能同时表达乙型肝炎(乙肝)病毒SS1、麻疹病毒HA和F及白细胞介素2(IL2)的非复制型重组痘苗病毒VHFIL2CKSS1,及其相应的复制型重组痘苗病毒VHFIL2SS1。这两株重
2、组病毒在CEF细胞上连续传至第25代,经Southernblot证实,两株病毒均在A24、A27间稳定整合有SS1基因,非复制型重组病毒C、K间基因稳定缺失。经RIA、ELISA及Westernblot方法检测,这两株病毒均可稳定分泌表达SS1蛋白,其分泌表达的SS1蛋白与CHO细胞表达的SS1蛋白性质相近,接近于天然。经免疫打点检测,两株病毒均可稳定表达麻疹病毒的HA与F蛋白以及IL2。而且VHFIL2CKSS1与VHFIL2SS1表达多种外源抗原的水平无显著性差异。VHFIL2CKSS1经皮内注射免疫家兔,4周后可诱发抗乙肝病毒SS1、抗
3、麻疹病毒及抗痘苗病毒的特异性IgG抗体;加强免疫2周后,特异性抗体滴度可上升4~16倍,与其初始病毒VHFIL2CK诱发的抗体水平相同,比VHFIL2SS1诱发的抗体滴度低0~4倍。非复制型多价重组痘苗病毒的构建,为评价非复制型痘苗病毒载体作为多价疫苗载体的有效性及安全性奠定了基础。关键词多价疫苗,非复制型痘苗病毒载体,遗传稳定性,免疫效果1989年WHO等国际组织制定了儿童疫苗计划(CVI),提出用20~30年时间发展一种一次接种可预防多种疾病的理想疫苗,即多价疫苗。多价疫苗可通过单次免疫预防多种疾病,明显降低了疫苗的成本,简化了免疫程序,
4、增加了免疫覆盖率,是疫苗发展的主要方向,具有重要的社会意义和经济效益。痘苗病毒有多个与复制无关的非必需区,插入外源基因容量大,有长期人体应用历史,无致癌性,免疫力持久,能诱发体液、粘膜和细胞免疫反应,使其更适合进行多价疫苗载体的研究。1近年来,以痘病毒为载体的疫苗研究取得了显著进展。为降低痘病毒载体的毒副作2用,一些学者构建了!非复制型∀痘病毒载体,如国外构建的ALVAC及NYVAC痘病毒载3体。这类载体在人体中不能繁殖后代,却能有效表达外源基因,提高了载体的安全性。我室将我国痘苗病毒天坛株基因组中C、K片段间大部分基因缺失,构建成功非复制
5、型痘苗病毒4载体。本研究的目的是应用该非复制型痘苗病毒载体,构建能同时表达乙型肝炎(乙肝)病毒表面抗原、麻疹病毒糖蛋白的HA与F及白细胞介素2(IL2)的非复制型重组痘苗病毒,及其相应的复制型重组痘苗病毒,并对其遗传稳定性和体液免疫效果进行了研究。本课题由国家863高科技生物领域及国家自然科学基金(39525001)资助。1998年9月10日收稿,9月24日修回。%22%病毒学报15卷材料与方法51质粒pNeoA2427含有串联的痘苗病毒天坛株基因组A24区及A27区基因序列,用来构建表达
6、SS1基因的重组质粒。pGJP5SS1含有乙肝adr株S基因及PreS1(2147aa)基因片段,后者融合于前者C端223位残基处,由中国科学院上海生物化学研究所汪垣教授惠赠。pJSB1175含有痘苗病毒天坛株p11k和p7.5k反向5-4串联的两个启动子。pNeoA2427LacZ含有由p25k启动子带动的LacZ基因。pNeoC质粒含有天坛株基因组C23L至C12L间基因片段。2病毒和细胞系重组痘苗病毒VHFIL2在tk区内重组有麻疹病毒的HA和F基因,在K/F片段交界处重组有IL2基因,6已完成小量人体观察,由本室阮力教授提供。非
7、复制型重组痘苗病毒VHFIL2CK是在VHFIL2重组病毒基础上缺失了C、K片段间大部分基因构建而成(由本室孙朝晖构建,资料尚未发表)。痘苗病毒天坛株++(TK)来自中国药品生物制品检定所,批号7601,由本室保存。非复制型痘苗病毒TKCK是将痘苗病毒天坛株C、K片段间大部分基因缺失后构建而成(由本室陆柔剑构建,资料尚未发表)。无病原物污染(SPF)的鸡胚购自北京生物制品研究所,原代鸡胚纤维母细胞(CEF)按常规方法制备。3病毒的重组、筛选与纯化培养18~24小时80%成片的CEF细胞,分别感染0.1~0.01pfu/细胞滴度的病毒VHFI
8、L2CK和VHFIL2,吸附1~1.5小时后,应用脂质体转染技术将重组质粒pA2427LacZ导入细胞,非复制型重组病毒在37#培养
