六溴环十二烷(hbcd)和菲(phe)对菲律宾蛤仔毒性效应和污染检测技术的研究

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1、谨以此论文献给我的父母、导师、朋友和所有关心海洋生态环境监测保护事业的朋友们！-------------张辉六溴环十二烷(HBCD)和菲(PHE)对菲律宾蛤仔毒性效应与污染检测技术的研究学位论文答辩日期：指导教师签字：答辩委员会成员签字：独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并

2、表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日---------------------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全

3、文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日六溴环十二烷(HBCD)和菲(PHE)对菲律宾蛤仔毒性效应与污染检测技术的研究摘要随着我国社会经济的高速发展，大量的污染物从陆地涌入近海，我国面临着海洋污染这个环境问题的巨大挑战。污染物在海洋生物体内的累积效应不仅会危及生物体本身，通过食物链传递最终可能会威胁人类的健康。六溴环十二烷（HBCD）是一种应用广泛的溴系阻燃剂，被发现在环境和动物体内普遍存在，由于其具有蓄积性和持

4、久性，被认为是潜在的持久性有机污染物（POPs）。多环芳烃（PAHs）是一类持久性有机污染物，随着海洋PAHs污染日益加剧，其对海洋生物的毒性研究已成为热点问题。菲（PHE）是具有湾结构和K区域的最小的多环芳烃分子，所以常被作为研究多环芳烃的模式化合物。为了研究HBCD和PHE对水生动物的毒性效应和它们在环境样品中的监测方法，我们开展了一系列工作。本研究以我国浅海重要经济贝类菲律宾蛤仔（Venerupisphilippinarum）为研究对象，研究了HBCD和PHE对菲律宾蛤仔的亚慢性毒性效应（解毒代谢系统，抗氧化

5、防御系统和大分子损伤），通过构建差异消减文库的方法筛选分子水平生物标志物，并采用酶联免疫方法（ELISA）初步建立了检测环境中菲含量的灵敏快速的试剂盒方法，为海洋环境污染监测和水产品安全评价提供技术支持。1.六溴环十二烷（HBCD）对菲律宾蛤仔毒性效应与生物标志物筛选的研究为了研究HBCD对菲律宾蛤仔的毒性效应，本章测定了以下几种生物标志物的变化(i)解毒代谢酶（EROD,GST,SOD）；(ii)非酶抗氧化小分子（GSH）;(iii)氧化压力指标（LPO,DNA损伤）。HBCD胁迫（0.086,0.86,8.6μ

6、g/L）后1-,3-,6-,10-,15d取样。结果表明鳃丝和消化盲囊组织中解毒代谢酶在不同处理组中均被诱导，且消化盲囊比鳃变化敏感。鳃和消化盲囊组织中的EROD和GST活性的峰值均出现在第10天，被极显著诱导(p<0.01)。鳃中SOD活性随浓度升高而增强，消化盲囊SOD值在第10天后出现高浓度处理组较中浓度处理组低的现象。两种组织中GSH含量均表现出时间-剂量依赖效应。鳃和消化盲囊的DNA损伤程度与染毒浓度呈负相关。F值在实验前6天逐渐下降至最低值，然后DNA启i动了自我修复机制，6天后至实验结束又逐渐上升。鳃

7、和消化盲囊中MDA含量均于第6天出现峰值。总而言之，不同组织不同生物标志物的变化趋势不同，这与污染物的种类、浓度和取样时间有关。GSH的线性变化关系良好，可以考虑作为HBCD污染胁迫下蛤仔体内生理生化指标变化的标志物。从各个生物标志物在污染胁迫下受到不同程度损伤可以看出，HBCD在环境相关浓度下对双壳贝类具有毒性效应。该结果可以为HBCD的环境毒性评估提供数据支持。利用抑制性消减杂交（SSH）技术构建了HBCD（8.6μg/L）胁迫下菲律宾蛤仔鳃组织正、反向cDNA消减文库，共得到800个克隆，其中315个单克隆。

8、正向文库158个单克隆，核苷酸平均长度473.35bp，基因新型率40.10%；反向文库157个单克隆，核苷酸平均长度450.46bp，基因新型率48.60%。GenBank序列号为JK729382-JK729426。利用序列分析软件BlastX和BlastN对单一基因进行功能分类，正向文库包含11个功能大类，反向文库包含9个功能大类。根据基因的新型率和与免