花苜蓿耐牧性相关基因克隆及遗传转化烟草

《花苜蓿耐牧性相关基因克隆及遗传转化烟草》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号Ｓ３３２．９学校代码１０１２９ＵＤＣ６３３．２学号２０１２２０４０４６奢丈《嗦乂＃硕±学位论文花首清耐牧性相关基因克隆及遠传转化烟草－ＣｌｏｎｉｎｏｆｔｈｅＧｒａｚｉｎｔｏｌｅｒａｎｔＲａｌａｔｅｄＧｅｎｅｏｆｇｇｇＭｅｄｉｃａｇｏａｌｃａｔａａｎｄＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎＴｏｂａｃｃｏｆ－ｔ、申请人：王丹学科口类：农学学科专业：草学研究方向：牧草遗传育种指导教师：王俊杰教授－论文提交日期：二〇五年六月内蒙古农业大学研巧生学位论文独创声明本人申明所呈交的学位论文是我

2、本人在导师巧导下进巧的研巧工作及取得的研巧成果。据我所知，除了文中倍别加从掠往巧致谢的地方外，论文中不包括其他人己经发《或巧写迂的研巧成果，也不包巧为获巧我校或其他教巧祝构的学位或证书而泼用过的材料一，与我同工作的同志对本研究巧化的任何责肤均己在论文中作了明巧的说明并巧示谢意。一切相关责任申请学位论义与资料若有不实之处，本人承巧，论文作者签名：飾日期：Ｗ支却Ｈｉ内篆巧农业大学研巧生学位论文版权使用授权书本人完全了解內巧古农化大学有关保护知识产权的规定，傅：研巧生在攻读学位期间论文工作的知识产巧单位巧巧巧古农业大学？本人保巧毕业离校后，

3、发巧论文或使用论文工作成果时香名单位为内巧古农业大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名巧内蒙古农业大学，学校有权保留并向国家有关部口或化构送交论文的复印件和电子文培，允许论文被蒼巧和借巧。学校可公布学位论文的全巧或部分内容（保密内容徐外），采用巧印、缩巧或其他手段保存论文，论文作者签名：气指号教师签名：日巧、心，摘要一首猜是世界范围内许多畜牧业发达国家建植放牧草场时的优选牧草之。但由于现有首猜品种耐牧性不强，使其推广与发展受限。长期Ｗ来，首语耐牧性状一一的改良及品种选育直是植物育种家的研巧热点之。与紫花首宿相比，黄花首。瘡耐

4、牧性状更突出，首猜中的耐牧性相关性状多来源于黄花首猜因此，研究黄花首猜的耐牧性相关基因及其功能对揭示首精耐牧性形成和调控的分子机制具有重要的学术价值。本研究呼伦贝尔黄花官猜为材料，在课题组前期转录组测ＭａＳ、ＭＳＣ５２、口Ｗ３基序所获耐牧相关基因序列的基础上，对耐牧性相关的／／因进行了克隆和生物信息学分析，并对Ｍ／片５２基因进行了遗传转化烟草的研巧。ｉ：获得ｌｉ＊下结果（１）黄花首稻的黄厕醇合成酶基因飾ＦＺＷ全长９７２ｂｐ，含８０１ｂｐ的开放－二，６个ａａ阅读框编码２６，主要为亮氨酸、丝氨酸等。基因属于２丽戊（２－ＯＤＤ）家族成员－酸依赖性双加氧酶

5、，不具有跨膜区域，二级结构富含ａ螺旋。亚细胞定位主要在细胞核中。该基因在强耐牧性植株中相对表达量显著高于在弱耐牧性植株中的相对表达量；根部的相对表达量显著高于再生茎与再生叶。（２）黄花首猜的线粒体伴侣公ａ／基因片段长９６６ｂｐ，编码３２１个主要为赖氨酸－ＡＴＰａＣａａ、亮氨酸、异亮氨酸等。该基因为ＡＡＡｓｅ家，，族成员端具有１个ＡＴＰ结合酶位点。－（３２－８８ｂａａ）黄花首荐的异黄丽哲化酶基因片段长１ｐ，编码２６２个，主要为亮氨酸、丝氨酸等。於／／为细胞色素Ｐ４５０家族成员，与漠黎首猜、甘一草、黄巧等豆科植物的口Ｈ基因致性较高。（３０－ＦＬＳ７

6、植４）利用双酶切法成功构建了ｐＣＡＭＢＩＡ３１Ａ＾物表达载体，并通过ＧＶ３１０１农杆菌介导转化烟草，获得了烟草再生苗。体系构建过程中，脱菌及抗性芽分化筛选培养基为：４．７４ｇＭＳ＋２０ｇ庶糖＋６．８ｇ琼脂＋１．０腿ＺｍＬ－＋Ｚｍ／ｍａｎ生根培养基为６ＢＡ＋０．３／ｍＬＮＡＡ５００ＬＣｅｆ＋４〇ｎＬＫ：４．７４ＭＳｎｇ惦ｇ；ｇ＋３０ｇ庶糖＋６．８ｇ琼脂。一（５）黄花首猜对放牧胁迫的响应是个复杂过程，需各类基因协同调控。本研巧分离得到与黄花首清耐牧性相关的３条基因。其中，ＦＬＳ、／２好基因的大量表达可促进体内黄丽类物质的积累，有利于提高植株的

7、抗氧化和抗病原体侵染能力。ＣＳ７、促进植株根系发育和共生根瘤菌的结瘤固氮线粒体伴侣公蛋白参与、ＡＴＰ转化过程中，到酵母呼吸链的组装，该基因的大量表达有利于保持体内高水平的氧化憐酸化过程，为植物的应激反应与补偿性生长提供能量。关键词：黄花首猜；耐牧性：基因克隆；ＦＬＳ；風如；７２化转基ｏｆｔｒａｚ－ＣｌｏｎｇｉｎｇｈｅＧｉｎｔｏｌｅｒａｎｔＲａｌａｔｅｄＧｅｎｅｏｆＭｅｄｉｃａｏｇｇｆａｌｃａｔａａｎｄＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎＴ