金钱鱼性别特异分子标记的筛选及雌雄群体遗传多样性分析

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1、分类号：Q959.483密级：UDC：597.556学号：2111201119户糸海洋太#硕士学位论文金钱鱼性别特异分子标记的筛选及雌雄群体遗传多样性分析向玲指导教师：李广丽教授邓思平副教授甲请学位类别：理学硕士专业名称：海洋生物学研究方向：海洋经济动物发育生物学学院名称：水产学院中国•湛江2015年6月摩依铪夂冬辨奏風会锒成主席委员：灸。4导师：冰/劢时间：別夕斗4i3学位论文原创性声明本人郑重声明:所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体

2、已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：年Z月多曰学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权广东海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于1、保密口，在______年解密后适用本授权书。2、不保密0。(请在以上相

3、应方框内打“V”）作者签名：故永2〇/r年g月多曰导师签名：年<月牛曰金钱鱼性别特异分子标记的筛选及雌雄群体遗传多样性分析摘要金钱鱼不但是一种具有观赏和食用价值的名贵海水经济鱼类，而且雌性生长速度明显高于雄性。因此，获得雌雄性别差异分子标记，从遗传角度鉴定金钱鱼的性别，对实现分子辅助育种及后续的单性化养殖意义重大。目前，随着环境恶化，金钱鱼种质资源退化越来越严重，因此，对金钱鱼遗传多样性进行评估，可为制定科学的资源保护提供理论参考。本文以金钱鱼为研究对象，采用SSR、AFLP、SRAP三种分子标记技术筛选其雌雄性别差异标记，并

4、分析雌、雄群体遗传多样性。主要结果如下：1、基于SSR技术的金钱鱼性别特异分子标记筛选及雌雄群体遗传多样性分析以金钱鱼基因组为模板，通过磁珠富集法得到65条微卫星序列，并设计了45对引物对金钱鱼雌雄基因池进行初步筛选。结果发现，2对引物（SAS21、SAS23）可扩增出雌雄差异条带。分别以雌雄金钱鱼各30尾DNA为模板，再次采用引物SAS21、SAS23进行扩增。引物SAS21扩增的差异条带在雌性金钱鱼中出现比率为30%，在雄性金钱鱼中所占比率为10%；而引物SAS23扩增的差异条带在雌性金钱鱼中所占比率为10%，在雄性金钱鱼

5、中出现比率为60%。以筛选获得多态性较高的3对微卫星引物对金钱鱼雌雄群体进行遗传多样性分析，结果表明，金钱鱼雌雄群体Nei’基因多样性指数（H）分别为0.5342和0.5408，Shannon’s信息指数（I）分别0.962和0.996；多态信息含量（PIC）分别为0.4708和0.4853；有效等位基因（Ne）分别为1.2034和1.252。2、基于AFLP技术的金钱鱼性别特异分子标记筛选及雌雄群体遗传多样性分析利用144对AFLP引物组合对雌、雄金钱鱼基因池进行初步筛选，得到5760个条带，其中3对引物（E7M8、E1M3

6、、E2M8）可扩增出雌雄差异条带。以雌、雄金钱鱼各30尾DNA为模板，再次用引物E7M8、E1M3、E2M8进行扩增，其中引物E7M8扩增的差异条带在雌性个体中所占比率为83.3%，在雄性个体中所占比例为40%；引物E1M3扩增的差异条带在雌性个体中所占比率为100%，在雄性个体中所占比率为44%；引物E2M8扩增的差异条带在雌性个体中所占比率41.1%，在雄性个体中所占比率为0%。利用筛选所得多态性较好的6对引物对金钱鱼雌、雄群体进行遗传多样性分析，结果发现雌性个体检测到51个多态位点，多态位点比例为29.48%，雄性个体检

7、测到68个多态位点，多态位点比例较高，达到39.31%。金钱鱼雌雄群体的H分别为0.1149和0.1465；I分别为0.1682和0.2169；Ne分别为1.2034和1.252；此外金钱鱼雌、雄个体间的相似系数为0.8927-0.8986，遗传距离为0.1069-0.1135，I表明金钱鱼雌雄间分化不大。3、基于SRAP技术的金钱鱼性别特异分子标记筛选及雌雄群体遗传多样性分析利用64对SRAP引物组合对金钱鱼雌、雄基因池DNA进行初步筛选，共得到461个扩增条带，并不具有雌雄特异条带。此外，引物Me4Em5扩增出的差异条带在

8、30尾雌性金钱鱼中所占比率为96.7%，在雄性金钱鱼中所占比率为30%。筛选所得多态性较好的3对SRAP引物组合对金钱鱼雌雄群体遗传多样性进行分析，结果发现金钱鱼雌性群体和雄性群体的H分别为0.3585和0.3984；Shannon指数分别为0.5269和0.5757；PIC