白梨品种抗腐烂病相关基因克隆与抗病机理研究

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1、—ｗ单位代码；１０３６４；Ｓ６６１．２分类号：１２７２００７，学号＿Ｊ＿＿密敬—签微怎＊乂參学位论文白梨品种抗腐烂病相关基因克隆与抗病机理研究ＣｌｏｎｉｎｇｏｆｔｈｅＧｅｎｅｓｉｎＣｈｉｎｅｓｅＷｈｉｔｅＰｅａｒＣｕｌｔｉｖａｒｓＲｅｓｉｓｔａｎｔｔｏＶａｌｓａＣａｎｋｅｒａｎｄＩｎｖｅｓｔｉａｔｉｏｎｏｆＩｔｓｇＲｅｓｉｓｔａｎｃｅＭｅｃｈａｎｉｓｍＩ研巧生：吴稽婷指导教师；失立武教授合作指导教师：申请学位口类级别：农学硕±专业名称：果树学研究方向

2、：果树种质资源与牛物巧术育种所在学院：园艺学院答辩委员会主席：芝—＇二〇五年六月ｋ—■＇。．．．４視３独创性声明本人声明所呈的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方夕ｈ，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研巧成果，也不包含为获得安徽农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与二我同王作的同志对本研巧所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：■签字日期年ｊ：月Ｓ日学位论文版权使业用授权书本学位论文作者完全了解

3、安徽农大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子文件，允许论文被查阅和借阅。本人授权安徽农业大学可将学位位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，收录到《中国学、汇论文全文数据库》，可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存编学位论文，向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）。签签备＾学位论文作者签名；指导教师字日期：衫！＾：年尸月＾：日签字日期；年ｒ月王日摘要我国是梨生产的大国，但是梨树一直遭受各种的威胁，损失严重，其中梨树腐烂病为一种弱寄生真菌引起的主要危害梨树主干、主枝和侧枝

4、的枝干型病害。目前防治方法主要是化学防治，但根本途径还在于克隆相关抗病基因，培育抗病品种。本研究拟以筛选获得的抗病白梨品种‘秋白’和感病品种‘茌梨’为研究材料，从分子水平上研究梨树抗腐烂病的机制。利用腐烂病病菌接种后IlluminaHiseqTM2000测序，并通过实时荧光定量（qRT-PCR）技术验证转录组的结果。用筛选的抗病性差异显著的基因进行全长克隆。用过氧化氢（H2O2）试剂盒测定不同处理后‘秋白’和‘茌梨’枝干内源的H2O2的水平。采用了高效液相色谱（HPLC）对‘秋白’和‘茌梨’枝干部位酚类物质的各组分进行定性和定量分析。采用酶联免疫分析法（ELISA），秋白和茌梨枝干中

5、内源SA和JA的含量。其结果如下：（1）通过离体休眠期枝条烫伤法接种白梨品种，发现‘秋白’抗病和‘茌梨’易感；（2）作IlluminaHiseqTM2000测序和qRT-PCR，筛选了一批抗病候选基因并挑选了其中2个进行全长克隆和qRT-PCR分析；（3）对酚类物质测定，发现酚类物质含量最多的是熊果苷、绿原酸和表儿茶素。用不同的外源处理后发现：‘茌梨’在外源SA处理后其内部的熊果苷、绿原酸和表儿茶素的变化呈下降趋势；外源JA处理后其内部的熊果苷和绿原酸含量变化都是先下降后上升；接种的腐烂病病菌后其内部的熊果苷和表儿茶素含量一直呈现上升趋势。‘秋白’其熊果苷含量变化一致，呈先下降后上升

6、趋势；绿原酸在接种腐烂病和JA处理后都呈现先下降后上升；表儿茶素在不同处理后呈现不同的变化趋势。（4）内源H2O2测定发现：外源的SA处理后两个品种都呈现H2O2水平的上升，而腐烂病病菌接种和外源的JA处理‘秋白’和‘茌梨’内源的H2O2水平变化趋势相反。（5）用外源的JA、SA处理，结果显示易感品种‘茌梨’对于外源的刺激，都会引起内源JA含量的上升和SA含量的下降，且二者表现出拮抗作用。‘秋白’对于外源的刺激，内源的JA含量都会下降；而内源的SA含量在用外源SA处理后含量会下降。关键词：梨树腐烂病，抗病性，转录组，过氧化氢，酚类物质，水杨酸，茉莉酸IAbstractChinaist

7、helargestcountryofpearproductionintheworld,butpeartreeshavebeensufferingfromvalsacanker,causinggreateconomiclosses.ThediseaseisakindofweakpathogenicdiseasescausedbyfungusV.malivar.pyrithatmainlyinfectthetrunk,branchandshoot,andcau