高效亲和层析填料的制备

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1、高效亲和层析填料的制备耿彦杰2015年12月中图分类号：TQ028.1UDC分类号：540高效亲和层析填料的制备作者姓名耿彦杰学院名称生命学院指导教师赵东旭副教授答辩委员会主席张贵锋研究员申请学位工程硕士学科专业生物工程学位授予单位北京理工大学论文答辩日期2015年12月ThepreparationofhighperformanceaffinitychromatographyresinCandidateName：YanjieGengSchoolorDepartment:LifeScienceFacultyM

2、entor:AssociateProf.DongxuZhaoChair,ThesisCommittee：Prof.GuifengZhangDegreeApplied:MasterofEngineeringMajor：BioengineeringDegreeby:BeijingInstituteofTechnologyTheDateofDefence：12/2015研究成果声明本人郑重声明：所提交的学位论文是我本人在指导教师的指导下进行的研究工作获得的研究成果。尽我所知，文中除特别标注和致谢的地方外，学位论文

3、中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得北京理工大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的合作者对此研究工作所做的任何贡献均已在学位论文中作了明确的说明并表示了谢意。特此申明。签名：日期：北京理工大学硕士学位论文摘要蛋白A亲和层析载量高、操作简单、一步就能得到纯度很高的抗体,无论是在欧美发达国家还是中国，绝大部分抗体纯化的第一步都选择了蛋白A亲和层析。每升蛋白A亲和层析填料价格超过1万美元，是抗体产品生产成本中的重要因素。为了降低抗体生产成本，本文尝试制备蛋白A亲和层析填料

4、，最终得到了高质量的填料。首先，我们选择了3种不同材料的基质作为填料的骨架，即Sepharose4FF、ProfinityEpoxide和PolarMC60-Epoxy，其中Sepharose4FF在600cm/h的线性流速时的压力就高达3.5bar，背景压力高、耐压性较差，首先被排除，ProfinityEpoxide在保留时间仅为0.5分钟时的动态载量就达到了静态载量的52.8%，传质速率比PolarMC60-Epoxy明显要好，所以我们最终选择了ProfinityEpoxide作为我们进行交联的骨架。其

5、次，通过比浊法确定了蛋白A在不同盐浓度下的稳定性，通过正交实验确定了最佳pH和最佳温度，通过全因素实验确定了最佳的盐浓度和反应时间。然后比较了不同蛋白A添加量对载量的影响，确定了最佳的蛋白A添加量。通过这几个实验确定了所有影响交联的参数，即pH为8.5，盐浓度为1.3mol/LNa2SO4，反应温度为37℃，反应时间为4小时，蛋白A的添加量为8mg蛋白A/mL基质。最后我们又进行了放大和重复，证明了该工艺稳定可放大。最后，我们对所制备的蛋白A亲和层析填料进行了评价。自制的蛋白A亲和层析填料在保留时间为8分钟

6、时动态载量为34.5mg/mL，在线性流速为1000cm/h时背景压力仅为2.7bar，实际使用时的蛋白A脱落为10ppm。最后，用自制的蛋白A亲和层析填料纯化了3株抗体，结果显示自制填料纯化抗体收率高，纯度好。本文建立了一种有效的蛋白A亲和层析填料制备方法，所得填料刚性强、传质快、背压低、载量高、收率高、纯度好，可以有效降低抗体的生产成本，为国产蛋白A亲和填料的制备提供了一种行之有效的方法。关键词：亲和层析；蛋白A；抗体；纯化；交联；I北京理工大学硕士学位论文AbstractProteinAaffinit

7、ychromatographyisaclassicalpurificationtechnologywithmanyadvantagesincludinghighcapacity,simpleoperationandgoodreproducibility.InmostcaseshighpurityantibodiescanbeharvestedafteronestepproteinApurification.Itismostfrequentlyusedinthefirststepofantibodypurif

8、icationaroundtheworld.Butthepriceofthisresinismorethan$10,000perliter,whichistooexpensiveformostcompanies.InordertoreducethecostofantibodyproductionwehavedonealotofworkonthedevelopmentofproteinAaffinitychroma