产kpc型碳青霉烯酶大肠埃希菌分子流行病学及耐药传播机制研究

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1、分类号：单位代码：密级：申请号：彳、曾硕士学位论文同等学力）中文论文题目：产型碳青霉烯酶大肠埃希菌分子流行病学及耐药传播机制研究英文论文题目：申请人姓名：王育瑛指导教师：夏大静教授专业名称：免疫学研究方向：所在学院：医学院论文提交日期年月产型碳青霉烯酶大肠埃希菌分子流行病学及耐药传播机制研究论文作者签名：指导教师签名：论文评阅人铖莩衹痈蒼丈孝评阅人评阅人评阅人评阅人答辩委员会主席：梅勒塊委员細咏委员“’丨做始德委员術委员芾幅委员答辩日期斤浙江大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，

2、论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙江大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年友月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙江大学有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。保密的学位论文在解密后适用本授权书）浙江大学硕士学位论文致谢致谢提笔的这一刻才真正意识到自己的在职研

3、究生生涯已经接近尾声，虽然之前有过迷茫有过犹豫甚至放弃，但是很庆幸自己坚持下来了，因为有导师，同事，实验室老师，亲人们的一路陪伴，支撑我的是你们无限的包容，热情的帮助，无私的指引，谢谢你们！由衷地感谢导师夏大静教授，在自己徘徊不前如无人认领的孩子的时候，是夏老师不弃收入门下，两年，每当自己困惑迷茫烦躁的时候，浮现脑海的永远是夏老师不变的慈宁的面孔，宽容的微笑，这是自己心中真正信念的源泉，珍惜夏老师给我继续学习深造的机会。感谢我亲爱的同事们，是齐艳老师结合我的工作所长为我的研究指明了方向，鼓励我在科学的领域大胆迈步；是杨玮，闫涛，钱香，胡笛，沈嫣婧，王紫琳亳无怨言地为我分担许多曰

4、常工作，让我能心无旁念的专注实验。谢谢大家的支持和理解！感谢浙江大学医学院附属邵逸夫医院临床微生物学实验室的老师和同学们，在这里，我运用工作之余的时间断断续续地完成了自己的硕士论文。俞云松教授严谨的治学态度、渊博的专业学识以及高深的科研思路，深深地感染了我。能在这么一个国内领先的科研机构中学习我感到自豪，对自己将来的研究学习更是受益匪浅。感谢蒋琰老师、华孝挺老师、陈衍老师、季京淑老师、阮陟老师、陈琼老师、刘丽琳老师、王建峰老师、李曦老师、王燕飞老师、史可人老师和王海萍老师，面对我这么一个对实验什么都不懂的门外汉，你们没有任何的嘲讽和轻视，而是细致耐心地教导我。你们不但无私地为我

5、打开了科学殿堂的大门，还指引我在科学的道路上不断地探索和思考，是你们的鼓励和帮助让我能突破重重困境坚定地走到最后，是你们让我在原本布满荆棘的毕业之路上收获了关怀和支柱，也是你们让我在繁忙枯燥的工作实验之余体会到快乐和活力。感谢我的家人，是你们为我解决了后顾之忧，能放手追求自己的梦想！最后再一次感谢在我攻读在职研究生期间所有帮助过我的老师，同事，同学与亲人，愿所有人一切安好！王育瑛年月日浙江大学硕士学位论文中文摘要产型碳青霉烯酶大肠埃希菌分子流行病学及耐药传播机制研究中文摘要碳青霉烯类抗生素是临床治疗多重耐药革兰阴性菌感染的重要药物，碳青霉烯耐药肠杆菌科细菌的流行给临床感染性疾病

6、的治疗带来了很大难题，而耐药的主要原因即是细菌产碳青霉烯酶，其中在我国以型碳青霉烯酶最为常见。本研究收集年月至年月杭州市中医院和浙江大学医学院附属第一医院临床共株产酶大肠埃希菌。利用纸片法测试所有菌株对种常用抗菌药物的敏感性；改良实验确认菌株产碳青霉烯酶，扩增确认她基因；脉冲场凝胶电泳（及多位点序列分型（技术进行菌株同源性分析。利用滤膜接合实验将临床菌株携带质粒接合转移至受体菌；碱裂解法提取质粒；细菌包埋核酸酶酶切再的方法判断质粒分子量大小；挑选代表菌株进行高通量测序及序列分析，注释携带有收基因的片段，并设计引物扩增其余菌株，分析基因的周围结构；扩增筛查其它常见的耐药基因。株临

7、床收集大肠埃希菌经确认均为产酶菌株，编码有基因，这些产酶菌株对大多常用抗菌药物的耐药率很高，均表现为多重耐药菌。流行病学分析显示，产酶菌株来源病人以中老年为主，送检的临床科室分布有一定的集中性，多集中在急诊科、和老年病科。分型可以将株菌株分为克隆株）、克隆株）和克隆株），其佘株为散发克隆。分型则分为个型，其中以型为主，共有株，另外还包括型株，型株，其佘型各有株，这些型之间同源性相距较远。临床分离大肠埃希菌往往携带多个质粒，质粒分子量大小在之间，而且大多具有可接合性。基因由质粒编码，高通量测序