水稻粒形基因gl7的克隆、功能研究及育种利用

水稻粒形基因gl7的克隆、功能研究及育种利用

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3、指导教师:钱前研究员.’申请学位类别:據学博生^:,专研业:生物化学与分子生物学究方向;植物分子生物学与基因工程培养单位:中国水稻研究所提中国农业科学院研究生院交日期20巧年11月密级:论文编号:中国农业科学院学位论文水稻粒形基因GL7的克隆、功能研究及育种利用Cloning,FunctionalResearchandUtilizationofGrainSizeGeneGL7inRice(OryzasativaL.)博士研究生:王跃星指导教师:钱前研究员申请学位类别:

4、理学博士专业:生物化学与分子生物学研究方向:植物分子生物学与基因工程培养单位:中国水稻研究所中国农业科学院研究生院2015年11月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationCloning,FunctionalResearchandUtilizationofGrainSizeGeneGL7inRice(OryzasativaL.)Ph.D.Candidate:YuexingWangSupervisor:Prof.QianQianMa

5、jor:Biochemistry&MolecularBiologySpecialty:PlantMolecularBiology&GeneticEngineeringNovember2015摘要粒形作为水稻重要的农艺性状,是衡量稻米外观品质的主要指标,也是影响水稻产量的重要因素。水稻粒形包括粒长、粒宽、粒厚和长宽比,属于数量性状,主要受核基因控制,遗传率较高,受环境影响相对较小。本研究利用一份籼型细长粒品种P13与日本晴、密阳46、Ⅱ-32和T461X配组,分析其F1、F2群体,发现P13与其他4份材料在

6、粒形性状上存在遗传基础差异,4个组合的F1粒长均显著高于双亲中值。利用P13与短粒品种日本晴构建F2群体,对水稻粒形QTL进行检测和定位,共检测到5个主效QTL位点,其中一个位于水稻7号染色体分子标记RM5508和RM234之间的7.7cM处。针对该粒长主效QTLGL7,以日本晴为轮回亲本,构建近等基因系NIL-GL7。利用一个20160株的BC6F2群体构建连锁遗传图,最终将GL7定位在一个20.4kb的区间内。通过生物信息学分析发现该区间有2个候选基因:Os07g0603300和Os07g060340

7、0。Os07g0603400编码一个未知功能的蛋白;Os07g0603300编码一个包含TON1RECRUITMOTIF(TRM)的蛋白,与拟南芥中的LONGIFOLIA1和LONGIFOLIA2具有20%~22%的氨基酸同源性,而LONGIFOLIA2/TRM1可能与微管蛋白的排列有关。对候选基因的表达分析结果表明,Os07g0603300在NIL-GL7幼穗部位的表达高于日本晴,而候选基因Os07g0603400则相反。进一步对Os07g0603300(GL7)基因进行RACE分析,发现在P13中有两

8、个转录本GL7-S1和GL7-S2。通过对引物CAPS1和210Q之间区段的DNA测序,我们在NIL-GL7中发现了一个17.1kb的DNA片段串联重复。该GL7位点的拷贝数变异(CopyNumberVariation,CNV)较好地解释了连锁交换分析中出现的大量“矛盾”单株的现象。P13在日本晴背景下,以Ubiquitin驱动过表达GL7-S1(pUbi::GL7-S1)和GL7-S2P13(pUbi::GL7-S2)均导致

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