犬瘟热、细小病毒病、腺病毒病（ⅰ型）三联活疫苗的研制

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1、学校代码：１０２２５学号：Ｂ１５１３４学位＾丈＾犬痘热、细小病毒病、腺病毒病（Ｉ型）Ｈ联活疫苗的研制刘大飞指导教师姓名：华育平教授东北林业大学申请学位级别；博击学科专业：野生动植物保护与利用论文提交日期；２０１５年９月论文答辩日期：２０１５年口月授予学位单位；东北林业大学授予学位日期：－答辩委员会主席：论文评阅人；《如丈争学校代码：１０２２５学号；Ｂ１５１３４学佐冷文犬痘热Ｉ型）、细小病毒病、腺病毒病（Ｈ联活疫苗的研制刘大飞指导教师姓名：华育平教授东北林业大学

2、申请学位级别；博±学科专业：野生动植物保护与利用论文提交日期；２０１５年１２月：２０１５年９月论文答辩日期授予学位单位；东北林业大学授予学位曰期；答辩委员会主席；论文评阅人：《从抑采乂争Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｄｅ：１０２２５ＣＲｅｇｉｓｔｅｒＣｏｄｅ：Ｂ１５１３４ＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅＤｅｇｒｅｅｏｆＤｏｃｔｏｒＳｔｕｄｉｅｓｏｎｃａｎｉｎｅｄｉｓｔｅｍｅｒｖｉｒｕｓｃａｎｉｎｅｐ，ａｒｖｏｖｉｒｕｓａｎｄｃａｎｉｎｅａｄｅｎｏｖｉｒｕｓＩｃｏｍｂｉ

3、ｎｅｄｌｉｖｅｐｖａｃｃｉｎｅＣａｎｄｉｄａｔｅ：ＬｉｕＤａｆｅｉＳｕｅｒｖｉｓｏｒＰｒｏｆ．ＨｕａＹｕｉｎｇｐｐＡｓｓｏｃｉａ化Ｓｕｅｒｖｉｓｏｒ：ｐＡｃａｄｅｍｉｃＤｅｇｒｅｅＡｐｐｌｉｅｄｆｏｒ：ＤｏｃｔｏｒＳｐｅｃｉａｌｉｔｙ：Ｗｉｌｄｌｉ佐ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎａｎｄ山ｉｌｉｚａｔｉｏｎＤａｔｅｏｆＯｒａｌＥｘａｍｉｎａｔｉｏｎ：Ｄｅｃｅｍｂｅｒ２０１５，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：Ｎｏｒｔｈｅ犯ｔＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ＾摘要犬痘热（Ｃａｎｉｎ

4、ｅｄｉｓｔｅｍｐｅｒ，ＣＤ）、犬细小病毒（Ｃａｎｉｎｅｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ，ＣＰＶ）病及犬腺病毒（Ｃａｎｉｎｅａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ，ＣＡＶ）病是当前对我国养犬业危害严重的３种病毒性传染病。常引起大批犬、貂和狐等动物发病，经济损失惨重。犬痘热病毒（Ｃａｎｉｎｅｄｉｓｔｅｍｅｒｖｉｒｕｓ，ＣＤＶ）可Ｗ感染包括大熊猫ｐ、小熊猫Ｗ及狮、虎、豹等食肉目所有８个科、灵长目的挪猴属、偶蹄目猪科和鐘足目海豹科等多种动物。ＣＰＶ可引起犬出血、ＰＶ还可性肠炎与屯肌炎，此外，Ｃ引起虎、狮、果子狸和猴等野生动物的感染。ＣＡＶ不仅流行于我国和

5、世界各地家养的犬、狐中，而且广泛地流行于野生的狐、熊、郊狼和沒能等动物中。疫苗免疫被认为是犬病防控的最直接有效措施。当前，广泛应用的主要有单价或多价弱毒苗。虽然对于防控犬的重大疫病起到了积极作用，但是还时有疫情发生的报道。同时，目前使用的这些的疫苗大部分为国外疫苗的复制品，其使用的疫苗株与我国优势流行株之间抗原差异显著。因此，研制适合国内流行毒株的疫苗己迫在眉睫。鉴于此，开展Ｗ下研巧：ＣＤＶ、ＣＰＶ及ＣＡＶ的分离鉴定：将发病犬的病料组织等经过处理后，分别接种鸡胚成纤维细胞（Ｃｈｉｃｋｅｎｅｍｂｒｙｏｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ

6、，ＣＥＦ）、ＣＲＦＫ及ＭＤＣＫ细胞进行传代培养一，并进行病毒形态学、ＰＣＲ及动物回归试验鉴定等系列鉴定。ＣＤＶ、ＣＰＶ及ＣＡＶ的细胞培养物上清电镜观察分别可见典型的副黏病毒粒子、细小病毒粒子和腺病毒粒子。动物回归试验显示，Ｈ种分离株分别可导致犬出现明显的相应的临床症状。ＰＣ艮和一序列分析进步确定分离株分别为ＣＤＶ－、ＣＰＶ和ＣＡＶ的野毒株，并分别命名为£０￥ＹＢ－－、ＣＰＶＹＮ和ＣＡＶＨ。ＣＤＶ－、ＣＰＶ及ＣＡＶ的致弱研究：ＣＤＶＹＢ株分别经ＣＥＦ、Ｖｅｒｏ和ＣＥＦ细胞连续传７０－ＹＮ和ＣＡＶ－、２０和１５代，ＣＰＶＨ分

7、别经ＣＲＦＫ和ＭＤＣＫ细胞连续传至１１０代，６５６７＇５病毒滴度逐渐提島并分别稳定在１〇ＴＣＩＤｓｏ／ｍＬ、１０ＴＣＩＤｓｏ／ｍＬ和１０ＴＣＩＤｓｏ／ｍＬ左右。并且王种病毒对犬的致病力随着传代次数的增加而逐渐降低。动物回归试验结果进一－－－步表明成功获得致弱毒株，分别命名为ＣＤＶＹＢＲ、ＣＰＶＹＮＲ和ＣＡＶＨＲ。ＣＤＶ、ＣＰＶ及ＣＡＶ致弱毒株的免疫原效力评价：分别将Ｈ种致弱毒株免疫犬，并用亲本强毒株进行攻毒保护试验，结果表明三种致弱毒株均可诱导犬产生理想的中和抗体，并对同源强毒株的攻击提供完全保护。ＣＤ－－、ＣＰＶ病

8、及ＣＡＶ病（Ｉ型）＾联活疫苗研制；将致弱毒株ＣＤＶＹＢＲ、ＣＰＶＹＮＲ和ＣＡＶ－