鼠伤寒沙门氏菌rfbn基因突变株的构建及其生物学特性初步研究

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1、分类号Ｓ８５２．４学号Ｓ２（ｍ巧１０四川巧化大学硕±学位论文鼠伤寒沙口巧菌ｒｆＭ基因突变株的构建及其生槪学特性巧步硏究尹云云指导教巧化巧科研巧员学稱专业巧防兽医学巧究方向巧祐巧生化与化巧学二零一左年Ａ月论文独钥性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论

2、文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：么之年月曰＾关于论文使用授巧的黄明、：本人完全了解四川农业大学有关保留使用学位论文的规定，即学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。□本论文不保密。□本论文保密，在适用本授＿＿年解密后权。□内划＂＂（请在Ｗ上Ｖ）研究生签名：年＾月曰方么之Ｐ。化导师签名：ＡＷ《年月／ＪＴ日中文摘要鼠伤寒沙口氏菌听ｉＶ基因编码的

3、蛋白为合成０－抗原的鼠李糖转移酶，它负责转运贏李糖。我们构建了鼠伤寒沙口氏菌所Ｗ基因缺失株Ｗ及阿拉伯糖调控所Ｗ基因表达的突变株，并对其进行生物学特性的巧巧研究，主要内容可归纳如下：１鼠伤寒沙口氏菌基因缺失株的构建鼠伤寒沙口氏菌所Ｗ基因大小９４５ｂｐ，我们构建了重组自杀性质粒ＹＡ４２８６－Ａ／ＷＶ，利用自杀性质粒介导的同源重组方法ｐ，构建了所Ｗ基因缺失株。：／ＬＰＳ图谱显示，Ａ／：／ＺＷ缺失株没有完整的ＬＰＳ，其ＬＰＳ结构包括类脂Ａ、核也多一５ａ－Ｗ糖和个半乳糖。我们构建了１听ｉＶ回补质粒，将其电转化入Ａ／ｙＺ缺失株，ＬＰＳ图谱显示－；Ｚ，１

4、５ａＷ回补质粒能够恢复ＡｉＶ缺失株的ＬＰＳ结构：／辦，表明成功构建诉７Ｖ基因缺失株。２鼠伤寒沙口氏菌阿拉伯糖调控ｒｙＷＶ基因突变株的构建我们通过改造诗Ｗ基因的ＳＤ序列和起始密码子，构建了重组自杀性质粒－ＹＡ４２８６－Ｍ利用自杀：ＴＴａｒａＣＰＴｐ４ｐａ妇ＢＡＤ々性质粒介导的同源重姐方法，构建了两株阿拉伯糖调控所Ｗ基因表达的突变株：Ａ所如：：ＴＴａｒａＣＰＢＡＤ＾ｙＳＭ起始密码子ＡＴＧ）和Ａ／卿Ｖ／Ｖ雌Ｚ：：ＴＴｆｌｍＣＰＢＡＤ所Ｗ（起始密码子ＧＴＧ）。在有阿拉伯糖存在条件下，Ａｔ押ＪＶＡＰｆｌ站：：ＴＴａｍＣＰｂａｄ坤Ｗ（起始密码子ＡＴＧ）

5、突变株，调控表达基因，使细菌能够合成完整的ＬＰＳ；而没有阿拉伯糖的条件下，所Ｗ基因不表达，其ＬＰＳ表型与Ａ／娜ｉＶ株相同。然而，在有阿拉伯糖存在条件下，Ａｒ／＆ｉＶ／ＶｆｌｇＺ：：ＴＴｆｌｒａＣＰＢＡＤｒｙＷＶ（起始密码子ＧＴＧ）突变株，娜ｉＶ基因少量表达，细菌没有完全恢复ＬＰＳ结构。３鼠伤寒沙口氏菌突变株生物学特性硏究为了解析基因对鼠伤寒沙口氏菌生物学特性的影响，我们系统地比较了突变株与野生株在生长曲线、泳动与群集、对多粘菌素Ｂ的抵抗力、粘附与入侵及毒力这几个方面的差异。结果表明ＺＷ缺失株与ＴＴ＜Ｃ，Ａ／ｙ社：：３ｒａＰｂａｄｔ＾ＺＷ（

6、起始密码子ＡＴＧ）突变株在体外生长曲线、细胞粘附率、细胞入侵率与野生株无显著性差异。相比之下，ｉＶ基因缺失后辦，菌株的泳动和群集能力显著下降（ＰＯ．ＯＯｌ），在多粘菌素Ｂ作用下的存活率显著下降（ＰｃＯ．ＯＯｌ），毒力Ｉ下降。同时，在阿拉伯糖存在条件下，Ａ所ＷＡｐｆｌ紅：：ＴＴｆｌｒａＣＰＢＡＤ／听Ｗ（起始密码子ＡＴＧ）突变株的泳动和群集能力得到提升，而完全恢复对多粘菌素Ｂ的抵抗力。综上所述，我们证实，如＃基因的缺失对鼠伤寒沙口氏菌的体外繁殖、粘附与入侵没有影响，却能显著降低细菌的毒力和对生物活性物质的抵抗力。关键词鼠伤寒沙口氏菌，生物学特性，

7、所Ｗ，调控延迟减毒ＩＩＣｏｎｓｔｒｕｅ材ｏｎａｎｄＰｒｅｌｉｍｉｎａｒｙＥｖａｌｕａ材ｏｎｏｆＢｉｏｌｏｉｃａｌｇｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｒｆｂＮＧｅｎｅｍｕｔａｎｔｏｆＳａｌｍｏｎｅｌｌａｅｎｔｅｒｉｃａｓｅｒｏｖａｒＴｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍＡＢＳＴＲＣＴ－ｎＲｈａｍｎｏｓｅａｉｍｏｒｔａｎｔｃｏｍｐｏｎｅｎｔｏｆＧａｔｉｅ打，ｉｓｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄｂ出ａｍｎｏｓｅ，ｐｇｙ化ａｎｓｆｅｒａｓｅｗｈｉｃｈｗａｓ