tweak通过外泌体介导巨噬细胞对卵巢癌转移调控的研究

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1、上海交通大学医学院硕士学位论文TWEAK通过外泌体介导巨噬细胞对卵巢癌转移调控的研究STUDYONTHEMECHANISMOFMACROPHAGESREGULATINGOVARIANCANCERCELLMETASTASISINDUCEDBYTWEAKVIAEXOSOMES学生姓名：胡媛专业：妇产科学学号：1127219275指导老师：邱丽华教授答辩日期：2015年4月24号培养单位：上海交通大学医学院附属仁济医院ITWEAK通过外泌体介导巨噬细胞对卵巢癌转移调控的研究STUDYONTHEMECHANI

2、SMOFMACROPHAGESREGULATINGOVARIANCANCERCELLMETASTASISINDUCEDBYTWEAKVIAEXOSOMES学生姓名：胡媛导师：邱丽华教授指导小组成员：刘伟教授吴霞副教授学号：1127219275专业：妇产科学研究方向：妇科肿瘤申请学位级别：硕士学位培养单位：上海交通大学医学院附属仁济医院关键词：TWEAK，外泌体，微小RNA卵巢癌，巨噬细胞，转移IIIIIIV上海交通大学医学院2012级硕士研究生学位论文TWEAK通过外泌体介导巨噬细胞对卵巢癌转移调控的

3、研究中文摘要第一部分TWEAK通过外泌体途径介导巨噬细胞抑制上皮性卵巢癌的转移目的：探讨TWEAK是否可通过外泌体途径介导巨噬细胞对上皮性卵巢癌转移的调控作用。方法：1.PMA诱导人单核细胞系THP-1为贴壁的巨噬细胞，TWEAK刺激巨噬细胞24h后抽提外泌体，透射电镜观察其形态；2.将THP-1来源的巨噬细胞分泌的外泌体用PKH67（greenfluorescentmembranelinker-dye）染料标记，染料标记后的外泌体刺激上皮性卵巢癌细胞株SKOV312h，DAPI染核后，用激光共聚焦显

4、微镜观察荧光的分布和强度；3.分别将PBS、巨噬细胞分泌的外泌体、TWEAK刺激后巨噬细胞分泌的外泌体与上皮性卵巢癌细胞株SKOV3、HO-8910PM共培养48h后，通过transwell实验检测其迁移、侵袭能力。结果：透射电镜可见巨噬细胞分泌的外泌体呈圆形，直径在30-100nm；激光共聚焦显微镜结果示，PKH67标记的外泌体主要分布在胞质，尤其围绕核周分布；Transwell实验结果示，与PBS空白对照组相比，巨噬细胞分泌的外泌体可提高卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力，而tweak刺激巨噬细胞后，其分

5、泌的外泌体则可降低卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力。结论：THP-1来源的巨噬细胞分泌的外泌体可被卵巢癌细胞内化，TWEAK可通过外泌体途径逆转巨噬细胞对上皮性卵巢癌的促转移作用。V上海交通大学医学院2012级硕士研究生学位论文第二部分分析TWEAK作用前后巨噬细胞释放的外泌体包裹的miRNA的表达谱，明确差异表达的miRNA目的：明确TWEAK作用前后巨噬细胞释放的外泌体中差异表达的miRNA方法：用PMA诱导人单核细胞THP-1为巨噬细胞后，将TWEAK（0，200ng/ml）分别作用于巨噬细胞24小时

6、后，取上清液抽提外泌体，沉淀后抽提RNA，用agilent人的miRNA芯片进行差异谱检测。结果：芯片结果示TWEAK作用于巨噬细胞后，巨噬细胞释放的外泌体中有55种miRNA表达上调，17种miRNA表达下调。文献报道证实有功能的表达上调的miRNA有15种，其中包括mir-7、mir-148a、mir-140、mir-625等，表达下调的miRNA有4种。结论：TWEAK作用前后巨噬细胞释放的外泌体中包裹的miRNA表达谱有差异，并选择mir-7作为继续研究的对象。第三部分研究TWEAK作用后巨噬

7、细胞释放的外泌体运输miRNA抑制上皮性卵巢癌转移的机制目的：探究TWEAK作用后巨噬细胞释放的外泌体通过传递miRNA抑制上皮性卵巢癌转移的具体机制。方法：1.PMA诱导人单核细胞系THP-1为贴壁的巨噬细胞，TWEAK刺激巨噬细胞24h后抽提外泌体，分别将PBS、巨噬细胞分泌的外泌体、TWEAK刺激后巨噬细胞分泌的外泌体与上皮性卵巢癌细胞系SKOV3、HO-8910PM共培养；2.共培养24h后分别提取两细胞株的RNA，采用Real-timePCR方法检测TWEAK刺激前后，巨噬细胞分泌的外泌体作

8、用后上皮性卵巢癌细胞系中mir-7的表达情况；3.共培养48h后分别提取两细胞株的蛋白质，采用WesternBlot方法检测上皮性卵巢癌细胞株中EGFR蛋白的表达情况，及其下游信号通路AKT和ERK蛋白的磷酸化及非磷酸化的表达情况。VI上海交通大学医学院2012级硕士研究生学位论文结果：Real-timePCR结果示TWEAK作用于巨噬细胞后，其分泌的外泌体与SKOV3、HO-8910PM细胞株共培养24h后，两卵巢癌细胞株中mir-7的表达水平高于TW