人类早期胚胎植入前高通量测序遗传学筛查的研究

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1、分类号：R71学校代码：10062密级：学号：2012602762硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：人类早期胚胎植入前高通量测序遗传学筛查的研究TITLEHigh-throughputsequencinginpreimplantationgeneticscreeningofhumanearlyembryo一级学科：临床医学二级学科：妇产科学论文作者：张静指导教师：白晓红天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R71学校代码：10062密级：学号：2012602762学位类别：科学学位☑专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION

2、论文题目：人类早期胚胎植入前高通量测序遗传学筛查的研究TITLEHigh-throughputsequencinginpreimplantationgeneticscreeningofhumanearlyembryo一级学科：临床医学二级学科：妇产科学论文作者：张静指导教师：白晓红天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。

3、学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密√。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：_____________日期：年月日导师签名：_____________日期：年月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：本研究利用单细胞全基因组扩增（WGA）和高通量测序技术对人类早期胚胎植入前的遗传学

4、信息进行筛查，从而为高通量测序技术在提高PGS/PGD技术的安全有效性方面奠定方法学基础。方法：选取于我院生殖中心行IVF/ICSI-ET并已生育健康婴儿的患者，他们将冻存的剩余第三天优质胚胎41枚和囊胚9枚自愿捐献用于科研并签署知情同意书。D3胚胎和囊胚分别活检单个卵裂球细胞和滋养外胚层5~10个细胞进行全基因组扩增（单细胞裂解、文库制备、扩增、检测扩增产物的浓度和完整性）。活检后D3胚胎进一步培养观察，若有囊胚形成则再行囊胚活检和全基因组扩增。全基因组扩增后进行高通量测序，将待测片段与微球体连接和cDNA序列测定从而对植入前胚胎进行染色体数目和16Mb以上缺失、重复的筛查。结果：1、活

5、检胚胎来源：41枚D3胚胎和9枚囊胚经解冻复苏后均存活。D3胚胎活检后发育成囊胚的共5枚，共对55枚（D3胚胎41枚和囊胚14枚）胚胎进行活检和全基因组扩增。2、全基因组扩增结果：42枚胚胎扩增成功（D3胚胎28枚和囊胚14枚），总扩增成功率为76.4%（42/55）。D3胚胎中28枚扩增成功，13枚扩增失败，D3胚胎单细胞的扩增成功率68.3%(28/41)。14枚囊胚全部扩增成功。对这42枚胚胎的全基因组扩增产物进行高通量测序分析。3、D3胚胎的高通量测序分析结果：28枚D3胚胎中11枚未检测出染色体数目异常和16Mb以上缺失和重复；2枚胚胎检出染色体数目异常，5枚胚胎检出片段＞16M

6、b的染色体缺失或重复，10枚胚胎检出染色体数目异常合并片段＞16Mb的缺失或重复。4、囊胚的高通量测序分析结果：14枚囊胚中8枚未检测出染色体数目异常和16Mb以上缺失和重复，5枚胚胎检出染色体数目异常，1枚胚胎检出片段＞16Mb的染色体缺失或重复。5、高通量测序技术染色体数目异常和＞16Mb的缺失、重复检出率：本研究中总体染色体数目异常或者＞16Mb染色体片段的缺失、重复的检出率为54.8%（23/42），D3胚胎和囊胚的检出率分别为60.7%（17/28）和42.9%（6/14）。6、同一胚胎的D3和囊胚期的高通量测序分析结果：5枚胚胎分别在D3和D5（囊胚）做了单细胞活检和滋养层细胞

7、活检、全基因组扩增和高通量测序，I天津医科大学硕士学位论文结果显示同一胚胎的D3单细胞和囊胚滋养外胚层的染色体检出信息是基本一致的。7、对捐献胚胎的患者夫妇（共8对）的临床资料进行回顾性分析发现：这些夫妇均单独存在或合并存在女方高龄（大于等于35岁）、严重男方因素，反复植入失败和不良妊娠史，所有检测的胚胎均来自存在这些高危因素的夫妇。涉及女方高龄、严重男方因素，反复植入失败和不良妊娠史因素的胚胎染色体数目异常或＞16Mb