循环外泌体相关microrna在干细胞介导的心血管修复中的作用机制研究

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1、分类号学号学校代码密级博士学位论文循环外泌体相关在干细胞介导的心血管修复中的作用机制研究学位申请人：赵晓琦学科专业：内科学（心血管病）指导教师：曾秋棠教授答辩日期：年月AdissertationsubmittedtoHuazhongUniversityofScienceandTechnologyfortheDegreeofDoctorTheRoleofCirculatingExosomalMicroRNAinStem/ProgenitorCellsMediatedCardiovascularRepairD.Candidate:ZhaoXiaoqiMajor:Cardiovascu

2、larMedicineSupervisor:Prof.ZengQiutangInstituteofCardiology,UnionHospital,TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScience&TechnologyWuhan430074,P.R.ChinaMay,2015邐华中科技大学_同济医学院係和罄技、：—一一■■蓍—酬■■耀■，“鬌酬駟，‘一—聽騸“独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研宂成果的总结。尽我所知，除文中己经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的

3、研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。学位论文作者签名：日期：义月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、縮印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密请在以上方框内打“华中科技大学博士学位论文目录縮略词表第一部分循环外泌体相关心肌源性通过作用

4、于调节急性心肌梗死后骨髓干祖细胞的动员第二部分急性心肌梗死相关血清外泌体对骨髄间充质干细胞内的潜在调节作用胃述攻读博士学位期间发表论文目录华中科技大学硕士学位论文縮略词表缺血性心脏病骨髄来源的干祖细胞骨髄单核细胞骨髓间充质干细胞基质细胞衍生因子趋化因子受体微小信使心肌源性急性心肌梗死多囊泡体脱氧核糖核酸核糖核酸主要组织相容性复合体趋化因子亚家族型受体心肌肌韩蛋白心肌肌韩蛋白盐敏感性高血压过氧化物酵体增殖物激活受体表皮生长因子受体转化生长因子华中科技大学博士学位论文摘要第一部分循环外泌体相关心肌源性通过作用于调节急性心肌梗死后骨干祖细胞的动员目的心肌源性在急性心肌梗死患者的外周循环

5、中显著升高，但其效应靶器官及功能学作用尚不清楚。循环中的外泌体是一类由细胞主动性分泌的具有细胞膜结构的小型运输体，能介导不同细胞或组织间、等遗传物质的交换。目前己知急性心梗能介导骨髓干细胞的动员。因此，本研宄拟探讨急性心肌梗死后循环中升高的是否通过外泌体远程传输到骨髓，从而发挥对骨髓中干祖细胞的动员作用。方法与结果在周龄雄性小鼠体内构建急性心肌梗死模型，小时后处死，使用实时定量技术检测四种、、以及在血清、血清外泌体、非外泌体血清成份、骨髓单核细胞以及其它组织中的表达水平。结果显示急性心肌梗死小时后在外泌体和非外泌体血清成份中均显著升高；且和主要在外泌体中升高，而则主要在非外泌体血

6、清成份中升高。为了研宄在外泌体中增高的作用，从急性心肌梗死模型小鼠的血清中分离外泌体并用标记，通过尾静脉注射到正常小鼠体内；小时后分离股骨，荧光显微镜检测骨组织切片阳性的细胞，发现阳性的细胞存在于骨髓干骺端，提示循环中的外泌体被转运到了骨髓中且存在于骨髄干细胞区域。同时比较急性心肌梗死后不同组织心肌源性的表达水平，发现骨髓单核细胞中表达量显著高于肝，肾，脾，说明循环中的主要被转运到骨髓中。下一步，分别将急性心梗分离的外泌体和非外泌体血清成份跟骨髄单核细胞共培养，发现只有外泌体共培养的骨髄单核细胞中的表达增高，说明主要是由外泌体介导了循环中向骨髄单核细胞华中科技大学博士学位论文的转

7、运。信号通路在骨髓干细胞动员中起重要作用。在体外转染的特异性化学模拟物（到骨髓单核细胞中，发现这四种均对有明显抑制作用。而后，将急性心梗小鼠体内分离的外泌体与骨髓单核细胞共培养，证明了急性心梗相关外泌体能够显著抑制骨髓单核细胞内的表达；而当被抑制后，急性心梗相关外泌体对的调节作用明显减弱。为了进一步验证急性心梗分泌的外泌体是否介导了骨髓干细胞的动员，在小鼠体内静脉注射急性心肌梗外泌体及正常对照外泌体，结果发现在急性心肌梗死外泌体处理的小鼠外周血中、及的细胞显著增多，提示急性心梗分