欧洲类禽h1n1猪流感病毒与h1n12009病毒猪体内重排病毒的鉴定

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1、分类号：单位代码：密级：学号：闻令博士毕业论文欧洲类禽猪流感病毒与病毒猪体内重排病毒的鉴定研究生：孔维立指导教师：刘金华教授申请学位门类级别：农学博士专业名称：预防兽医学研究方向：动物分子病毒学与免疫学所在学院：动物医学院二零一五年五月Ph.D.DissertationIdentificationofreassortantvirusesbetweenEurasianAvian?likeSwineInfluenzaVirusesandPandemic/2009InfluenzaVirusesinPigsPh.D.Candidate:Weil

2、iKongSupervisor:JinhuaLiuMajor:PreventiveVeterinaryMedicineResearchField:AnimalMolecularVirology&ImmunologyChinaAgriculturalUniversityMay,2015本研究由国家自然科学基金项目（项目编号：和国家重点基础研究发展计划（项目）（项目编号：资助ThisworkwassupportedbyNationalNaturalScienceFoundationofChina(#31172323),andNationalB

3、asicResearchProgram(973program;#2011CB504702).独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中已经注明引用和致谢的内容外，论文中不包含本人和其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：时间：上年（月曰关于学位论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定。本人同

4、意中国农业大学有权保存及向国家有关部门和机构送交论文的纸质版和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人同意中国农业大学将本学位论文的全部或部分内容授权汇编录入《中国博士学位论文全文数据库》或《中国优秀硕士学位论文全文数据库》进行出版，并享受相关权益。保密的学位论文在解密后应遵守此协议）学位论文作者签名时间：■年【月日摘要基因重排是流感病毒大流行毒株产生的主要方式。猪由于对禽流感和人流感病毒均易感，一直被认为是流感病毒的混合器。目前，病毒和欧洲类禽（猪流感病毒在猪群中共同流行，具备发生基因重排产生新病毒的条件。病毒在人群中具有高度传播性，而人群中

5、又缺乏针对猪流感病毒的的抗体，这两种病毒一旦结合，很有可能产生出潜在的大流行病毒，因此需要评价其重排病毒的潜在危害。但由于对猪流感病毒的监测缺乏系统性，我们难以评价这两种病毒产生的重排病毒的潜在危害性。因此，本论文拟以猪为动物模型，将两种病毒同时感染猪，模拟两种病毒的自然重排方式，通过系统分析这些重排病毒的基因型以及对哺乳动物的致病性和传播性，对重排病毒的潜在危害进行预测，为将来流感大流行的防控提供理论依据。通过将病毒和猪流感病毒以相同的剂量感染猪，分别从猪的上下呼吸道进行病毒分离。通过蚀斑纯化和全基因测序，我们从个克隆中分离到了株重排病

6、毒，重排病毒的分离率为。序列分析表明，这些重排病毒共分为个基因型，其中携带的重排病毒有株，占据重排病毒总数的包含个基因型；携带的重排病毒为株，占据重排病毒总数的，包含个基因型。在所有基因型组合中，携带病毒基因的重排病毒占据主导地位。猪上呼吸道重排病毒的分离率为分离到的重排病毒大部分携带的基因，占据重排病毒的猪下呼吸道重排病毒的分离率为，与上呼吸道分离的重排病毒相反，其中大部分重排病毒携带的基因，其占据。这些结果说明猪的下呼吸道更容易产生重病毒，携带不同基因的重排病毒具有不同的上下呼吸道偏好性。为了探究这些重排病毒的致病性和传播性，本研究以

7、小鼠和豚鼠为动物模型，探究了种重排病毒对小鼠的致病性和对豚鼠的传播性。结果发现，所有重排病毒均对小鼠易感，并且发现种重排病毒显著增强了对小鼠的致病性。其中种重排病毒都可以在豚鼠间进行传播，有种病毒表现出高效传播能力。同时发现，这些具有高效传播力的病毒也呈现出对小鼠高毒力表型，进一步比照病毒基因序列分析发现，这些病毒具有相似的基因组合特征：都含有病毒的或者基因，同时也含有的基因。为了进一步解析病毒和基因增强重排流感病毒致病力的机制，本研究通过分析受体结合特性、聚合酶活性以及的表达水平，探究了病毒的和基因对重排病毒致病性的影响。结果发现病毒的

8、基因使重排病毒获得了禽类样受体结合特性，从而提高了流感病毒在小鼠中的毒力作用，并进一步证明了病毒的基因是影响这一分子机制的关键位点。同时还发现病毒的基因提髙了病毒的聚合酶活性进而影响病毒的致病