葡萄查耳酮合酶基因克隆及表达分析

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2、－．‘ｉＶ一？？．．．＇．．．也＇．＇．■．■？ｙ，－／二／．？．－．４、Ｊ学位论文独创性声明本人承诺：所呈交的学位论文是本人在导师指导下所取得的研巧成果。论文中除特别加Ｗ标法和致谢的地方外不包含他人和其他机构已经撰写或发表过的研巧成果其他同志的研究成果对本人的启示和所提供的帮助均已在论文中做了明确的声明并表示谢Ｊ３、〇学位论文作者签名：幕建早学位论文版权的使用授权书本学位论文作者完全了解江宁师范大学有关保留、使用学位论文的

3、规定及学校有权保留并向国家有关部口或机构送交复印件或磁盘允许论文被查阔和借阅。本文授权迂宁论全进、学用影师范大学可将位文的部或部分内容编入有关数据库并行检索可采印制、汇论文且子文容和纸论的内容缩印或扫描等复手段保存编学位并本人电档的内质文一。相致。保密的学密位论文在解后使用本授权书達吏侵论签：秦导签：学位文作者名指教师名Ｈ平＇■■签：日名日期必年月＾／辽宁师范大学硕士学位论文摘要类黄酮物质的合成途径中的关键酶为查耳酮合酶(chalconesynthase，CHS)，它催化3分子的丙二酰辅酶A

4、(malonylCoA)与1分子的香豆酰CoA(coumarylCoA)生成4，5，7-三羟基黄烷酮(narigeninchalcone)。葡萄果实中含有极其丰富的营养物质，其中包括多酚类物质，是一种大众性水果，常用于鲜食、制成果汁、葡萄干和葡萄酒等。但葡萄的抗逆性较差，易受环境影响，导致其产量和质量下降。为探讨CHS基因在葡萄植株防御体系中的作用，以及在次生代谢物合成中的作用，本实验进行如下研究：1.实验中，以NCBI和TIGR数据库为基础，采用RT-PCR技术，从葡萄中成功克隆得到两个查耳酮合酶（CHS）的cDNA开放阅读框（

5、ORF）序列VvCHS1和VvCHS3。其中，VvCHS1序列长1182bp，编码393个氨基酸；VvCHS3序列长1170bp，编码389个氨基酸。2.在TIGR基因索引数据库中，以Grape和chalconesynthase为关键词进行搜索，查询出具有同源性的VvCHS基因的所有EST序列。利用NCBI的ORFFinder程序，对得到的序列进行ORF预测，结果显示具有完整ORF的序列共5个，并利用软件对其进行生物信息学分析。分析内容包括：各种氨基酸的组成（种类及数量），以及蛋白的一级结构和理化性质（信号肽和跨膜结构域等）、疏水

6、性、二级结构、三级结构，启动子中含有的顺式作用元件和进化分析等。3.葡萄叶片经过紫外线（UV）辐射和水杨酸（SA）喷洒处理后，采用实时荧光定量PCR技术，对VvCHS1和VvCHS3的表达量的变化情况进行分析。通过实验和数据分析处理，得出结论：在不同的处理条件下，二者的相对表达量均出现了具有一定的规律性的变化，结果显示为先上升后缓慢下降趋势，且都在12h处表达量达到最高值。这表明VvCHS1和VvCHS3基因通过调节表达量参与植物抗逆过程。本文对葡萄查耳酮合酶VvCHS1和VvCHS3基因克隆，以及对其所编码蛋白的理化性质和进化关

7、系分析，为进一步研究该基因的功能及其在葡萄适应性机制中的调节作用以及代谢转换奠定了基础。关键词：葡萄遗传；查耳酮合酶；基因克隆；生物信息学分析；实时荧光定量PCRI葡萄CHS基因的克隆及表达分析CloningandexpressionanalysisofchalconesynthasefromVitisviniferaAbstractChalconesynthaseisakeyenzymemetabolicpathwaysfrombenzenepropanemetabolismtoflavonoidssynthesis.Itsca

8、talytic3malonylCoAwith2moleculescoumaticacylCoAgenerated4，5，7-thihydroxyflavanone(narigeninchalcone).Thegrapescontainsextrem