长江、黄河、辽河水系中华绒螯蟹野生群体遗传多样性的微卫星分析

《长江、黄河、辽河水系中华绒螯蟹野生群体遗传多样性的微卫星分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、学校代码：10264研究生学号：M120101083上海海洋大学硕士学位论文长江、黄河、辽河水系中华绒螯蟹野生群体遗题目：传多样性的微卫星分析Thepopulationgeneticdiversityanalysison英文题目：threewildstocksofEriocheirsinensisfromdifferentwatersystemsusingmicrosatellitemarkers专业：水产养殖研究方向：中华绒螯蟹遗传育种姓名：刘皓指导教师：成永旭，吴旭干二〇一五年三月十八日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注答辩地点答辩日期上海海洋大学学位论文原创

2、性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫

3、描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，本学位论文属于在年解密后适用本版权书。不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文长江、黄河、辽河水系中华绒螯蟹野生群体遗传多样性的微卫星分析摘要与传统的遗传标记不同，分子标记可以从DNA水平上体现出物种的遗传多样性，其中微卫星DNA标记由于具备诸多优点，通常被认为是群体遗传多样性分析的理想标记。微卫星标记用于中华绒螯蟹（Eriocheirsinensis）群体遗传学分析的研究已有一些报道，然而之前报道由于采样时间较早、水域不同加之中华绒螯蟹（河蟹）野生群体的生存繁衍处在动态变化中，长江、黄河、辽河三个主产

4、水系的遗传现状尚存在不确定性，进一步的种质评价工作有待进行。本研究针对中华绒螯蟹种群遗传多样性的微卫星分析这一目标，为更好的开展微卫星分子标记在河蟹种群遗传分析上的应用，首先从优化DNA提取方法入手，然后比较优选微卫星PCR产物分型技术，最后通过对长江、黄河和辽河三个水系野生河蟹种群的遗传结构加以分析，以期获得河蟹主产水系野生群体的当前的种质资源状况，对河蟹遗传育种工作提供基础资料。1.为优化中华绒螯蟹基因组DNA提取方法，本试验采用酚-氯仿法和吸附柱型试剂盒分别对中华绒螯蟹的鳃、肌肉、血淋巴液和刚毛4种组织进行DNA提取，并从纯度、浓度、片段完整性及微卫星标记PCR扩增效果共4个方面评价提

5、取DNA的质量。结果显示：使用酚-氯仿法提取得到的DNA片段比用试剂盒提取的更完整，且DNA的浓度较高，但纯度稍低；两种提取方法，刚毛和血淋巴液中的DNA纯度都高于鳃和肌肉，4种组织中的DNA含量依次为鳃>肌肉>刚毛>血淋巴液，未剪碎刚毛中未能提取到基因组DNA；微卫星标记PCR产物的电泳条带表明，两种提取方法下4种组织中提取的DNA质量均可满足微卫星标记的应用要求。最终建立起一种简便的非损伤性中华绒螯蟹的采样及其DNA提取方法，这对于进行中华绒螯蟹遗传育种和分子标记研究等方面具有积极作用。2.为对比荧光标记分型技术和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对微卫星等位基因分型的效果，本试验选择6对微卫星引

6、物，对60个中华绒螯蟹个体的总DNAI上海海洋大学硕士学位论文分别进行PCR扩增。荧光标记法共检测出等位基因129个，平均每个位点21.5个等位基因，聚丙烯酰胺凝胶电泳共检测出等位基因174个，平均每个位点29个等位基因。对位点Esin67的PCR产物分别进行重复检测，发现荧光标记法的重复率为100%，而聚丙烯酰胺凝胶电泳法两次结果存在较大差异，该结果证实了荧光标记法在检测的可靠性显著的高于聚丙烯酰胺凝胶电泳。对两种方法的检测效率和经济成本的分析表明，荧光标记法虽然成本较高，但效率亦高于聚丙烯酰胺凝胶电泳法。建立单重PCR产物的多重毛细管电泳分型技术是提高效率、降低成本的有效途径。3.利用2

7、3个微卫星标记，对3个水系（长江、黄河、辽河）河蟹的野生群体进行遗传多样性及遗传结构分析。共检测到745个等位基因，各位点平均等位基因数为31个。遗传多样性分析显示，23个微卫星座位的平均多态信息含量（PIC）为0.894，其中22个为高多态性位点（PIC>0.5）。所有位点平均观测杂合度为0.736，平均期望杂合度为0.903，有多个座位在不同群体中偏离哈代-温伯格平衡，总体上处于杂合子缺失状态。3个群体均