探究混合模式吸附层析分离猪血免疫球蛋白研究

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1、浙江大学化学工程与生物工程学系硕士学位论文混合模式吸附层析分离猪血免疫球蛋白研究姓名：庄甜甜申请学位级别：硕士专业：化学工程指导教师：林东强20100101浙江大学硕士学位论文摘要本文将新型的混合模式吸附层析应用于猪血免疫球蛋白的分离纯化。混合模式吸附层析结合了静电与疏水相互作用，吸附容量大，具有非盐依赖的吸附特性，在高盐和低盐条件下都可以高效吸附目标蛋白。一般可以通过调节pH，改变蛋白质和／或吸附剂的所带电荷，利用静电排斥作用协助洗脱。我国年产猪血100多万吨，目前大部分废弃，造成资源的严重浪费和环境污染。猪血中富含蛋白质，其中免疫球蛋

2、白高达2％，具有抗菌、抗病毒等生物活性。开发合适的分离工艺，实现猪血蛋白的高效经济分离，变废为宝，具有重要的意义。首先考察了不同沉淀法分离猪血浆中的纤维蛋白原，包括冻融法、乙醇法、聚乙二醇法和硫酸铵法，比较发现硫酸铵法简单易行，成本低，周期短，分离纤维蛋白原效果好。无需调节血浆pH，用20％饱和度的硫酸铵溶液沉淀分离猪血浆中的纤维蛋白原，离心后的上清液中富含免疫球蛋白，便于后续分离。．考察了商品混合模式吸附介质MEP．HyperCel对猪血免疫球蛋白的吸附性能，包括静态吸附平衡和吸附动力学，研究了pH和盐浓度对吸附的影响，确定了合适的上样

3、和洗脱条件，从硫酸铵沉淀的上清液中直接分离免疫球蛋白，纯度达到77．4％，得率为11．5mg／ml血浆。进一步研究了实验室自制的3种亲硫性混合模式吸附剂(Cell．TuC—DVS．MMI，Cell．TuC．DVS．MEP和Cell．TuC．DVS．MBI)对猪血免疫球蛋白的吸附性能。研究发现，pH是影响吸附的关键因素，Cell．TuC—DVS．MMI吸附容量比较大，对pH敏感，吸附选择性较好，适合于分离猪血免疫球蛋白。优化了层析分离条件，以硫酸铵沉淀的上清液为料液，pH5平衡上样，pH7洗脱去除杂蛋白，pH3．8洗脱得到猪血免疫球蛋白，电

4、泳分析纯度达到94．3％，纯化倍数为5．6。本文实现了硫酸铵盐析和混合模式吸附层析的有机结合，利用硫酸铵沉淀分离纤维蛋白原，沉淀上清液无需处理，直接利用混合模式吸附层析分离，得到纯度较高的猪血免疫球蛋白。本文工作为猪血资源的综合开发利用提供了新方法。关键词：混合模式吸附层析，免疫球蛋白，猪血，MEP．HyperCel，亲硫性混合模式吸附剂TT浙江大学硕上学位论文AbstractThenewtechnologyofmixed—modeadsorptivechromatographywasappliedforthepurificationof

5、immunoglobulin(Ig)fromporcineplasma．Combiningtheelectrostaticandhydrophobicinteractions，mixed-modeadsorptivechromatographyhasahighadsorptioncapacityandshowsthesalt·independentproperty．Thetargetproteincanbeadsorbedunderbothhighandlowsaltconcentrations．Theelutionisinduced、)

6、l，iththeelectrostaticrepulsionbetweentheproteinandadsorbentsbyadjustingthepHvalue．InChina,thereisabout1milliontonsporcinebloodeveryyear,whichismostlyabandoned，resultinginthewasteofresourcesandsomeenvironmentalpollution．Porcinebloodisrichinsomeusefulproteins，especiallyitco

7、ntainsupto2％ofimmunoglobulin．Mostofimmunoglobulinhasantibacterial．antiviralandotherbiologicalactivities．Therefore，developingasuitableprocessfortheeconomicandefficientseparationofporcinebloodproteinsisnecessary．Firstly,severalprecipitationmethodswereexploredtoseparatethefi

8、brinogenfromporcineplasma,includingfreezingandthawing，additionofethanol，PEGandammoniumsulphate．A