液相色谱基础知识

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1、液相色谱基础知识1.色谱图和峰参数⊕色谱图（chromatogram）--样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号－时间曲线，又称色谱流出曲线（elutionprofile）.⊕基线（baseline）--流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。⊕噪音（noise）――基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。⊕漂移（drift）基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。⊕色谱峰（peak）--组分流经检测

2、器时相应的连续信号产生的曲线。流出曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称性正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。不对称色谱峰有两种：前延峰（leadingpeak）和脱尾峰（tailingpeak）.前者少见。⊕拖尾因子（tailingfactor,T）--T=B/A,用以衡量色谱峰的对称性。也称为对称因子（symmetryfactor）或不对称因子（asymmetryfactor）《中国药典》规定T应为0.95～1.05。T<0.95为前延峰，T>1.05为拖尾峰。⊕峰底――基线上峰的起点至终点的距离。⊕峰高（Peakheight,h）――峰的最高点至峰底的距离。⊕峰宽（peakw

3、idth,W）--峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。W=4σ。⊕半峰宽（peakwidthathalf-height,Wh/2）--峰高一半处的峰宽。Wh/2＝2.355σ。⊕标准偏差（standarddeviation,σ）--正态分布曲线x=±1时（拐点）的峰宽之半。正常峰宽的拐点在峰高的0.607倍处。标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的分散程度。σ小，分散程度小、极点浓度高、峰形瘦、柱效高；反之，σ大，峰形胖、柱效低。⊕峰面积（peakarea,A）――峰与峰底所包围的面积。A=×σ×h＝2.507σh=1.064Wh/2h2.定性参数（保留值）⊕死时

4、间（deadtime,t0）--不保留组分的保留时间。即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。在反相HPLC中可用苯磺酸钠来测定死时间。⊕死体积（deadvolume,V0）――由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。它包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙（被流动相占据，Vm）、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只有Vm参与色谱平衡过程，其他3部粉只起峰扩展作用。为防止峰扩展，这3部分体积应尽量减小。V0＝F×t0（F为流速）⊕保留时间（retentiontime,tR）--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。⊕保留体积（retentionv

5、olume,VR）--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值时流出溶剂的体积。又称洗脱体积。VR＝F*tR.⊕调整保留时间（adjustedretentiontime,tR’）--扣除死时间后的保留时间。也称折合保留时间（reducedretentiontime）。在实验条件（温度、固定相等）一定时，tR’只决定于组分的性质，因此，tR’(或tR)可用于定性。TR’=tR-t0⊕调整保留体积（adjustedretentionvolume,VR’）--扣除死体积后的保留体积。VR=VR-V0或VR=F*tR’3.柱效参数⊕理论塔板数（theoreticalplatenumber,

6、N）用于定量表示色谱柱的分离效率（简称柱效）。N取决于固定相的种类、性质（粒度、粒径分布等）、填充状况、柱长、流动相的种类和流速及测定柱效所用物质的性质。如果峰形对称并符合正态分布，N可近似表示为：N=（tR/σ）2=16(tR)2/W=5.54(tR/W1/2)2W：峰宽；σ：曲线拐点处峰宽的一半，即峰高0.607处峰宽的一半。N为常量时，W随tR成正比例变化。在一张多组分色谱图上，如果各组份含量相当，则后洗脱的峰比前面的峰要逐渐加宽，峰高则逐渐降低。用半峰宽计算理论塔板数比用峰宽计算更为方便和常用，因为半峰宽更容易准确测定，尤其是对稍有拖尾的峰。N与柱长成正比，柱越长，N越大。

7、用N表示柱效时应注明柱长，，如果未注明，则表示柱长为1米时的理论塔板数。（一般HPLC柱的N在1000以上。）若用调整保留时间（tR’）计算理论塔板数，所得值称为有效理论塔板数（N有效或Neff）=16(tR’/W)2⊕理论塔板高度（theorticalplateheight,H）每单位柱长的方差。H=。实际应用时往往用柱长L和理论塔板数计算：H=L/N4.相平衡参数（distributioncoefficient,K）--在一定温度下，化合物在两相间达到分配平衡时，