时间分辨荧光免疫法与酶联免疫法检测乙型肝炎病毒的对比分析

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1、时间分辨荧光免疫法与酶联免疫法检测乙型肝炎病毒的对比分析【关键词】时间分辨荧光免疫酶联免疫法乙型肝炎病毒乙肝五项时间分辨荧光免疫（简称TRF）分析法是用三价稀土离子作为示物，标记蛋白质，多肽，激素，抗体，核酸探针或生物活性细胞，待反应体系发生后，用时间分辨光分析仪测定最后产物中的荧光强度，以此来判断反应体系中被测物质的浓度，笔者结合患者血清学指标乙肝五项（聚合酸链反应）性，初步探讨TRF在检测乙型肝炎病毒中的临床价值，报道如下：1实验资料1.1材料和仪器200份血清均为ELISA法确诊为HBV感染者，同时抽样检测乙肝五项定量（TRF）。乙肝五项（ELISA）试剂由万泰生物药业股

2、份公司提供。TRF试剂由上海新波生物技术有限公司提供，时间分辨荧光分析仪也是上海新波生物技术有限公司提供。1.2原理和方法1.2.1技术原理：TRF采用了双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析法，其中抗原与已包被的抗体结合成抗体抗原复合物，洗涤后再加入銪标记抗体与已结合的抗原联接成抗一抗体—抗原—抗—抗体—Eu复合物。增强液将标记在抗体上的Eu3+离子解离到溶液中，在溶液中Eu3+离子和增强液形成了高荧光强度的螯合物。荧光强度和样品中的抗原浓度成正比。31.2.2实验方法严格按说明书操作，将试剂盒放置室温平衡，配备洗涤液，使用前一小时内按1：50倍稀配备銪标记物，吸取100ml样本及对

3、照，按顺序加入微孔反应小孔中并加贴封片，放37度恒温1小时，用洗板机洗涤4次拍干，再每孔入100ml已稀释的销标记物、加封条，放37度1小时，第2次孵育结束后，洗板机洗涤6次，拍干，每孔加入增强液100ml，然后在室温下用振荡仪振荡5分钟，上分析仪检测。2结果乙肝五项定量参考范围，HBSAG：0-0.5hg/ml，HBsAb：0-10mIU/ml，HBeAg：0-0.5PEIU/ml，HBeAb：0-0.2PEIU/ml，HBCAb：0-0.9PEIU/ml。表1200例标本乙肝五项定量与酶联免疫测试HBV含量关系3讨论TRF采用于双抗体夹心时间分辨荧光分析法，其灵敏度高达0.

4、01Fg/ml，可准确定量出0-1010个拷贝的病原体，可清楚的反映出HBV的感染和复制情况，该技术在一整套时间分辨荧光免疫分析仪中进行，整个过程可在2个半小时完成，设备自动化程度高，操作简单，而且保证了检测的准确性和特异性，HBSAg的检测可协助乙肝的早期诊断，在乙肝病人中HBSAg检出率在70%以上，可协助乙肝的鉴别诊断，阳性者可能为急性、慢性患者，乙肝潜伏期或无症状携带者，有助于乙肝的预后估计，定量检测血清中HBSAg，对乙肝病人动态疗效观察，消毒药物考核很有价值。3本文结果显示：HBEAg>3.0和HBCAb>3.5有血清中HBVDNA定量在103-109c

5、opy/ml，说明患者已处于高病毒血症期，HBeAb>3.0和HBCAb>3.5的血清HBVDNA在10-106copy/ml，此时患者进入恢复早期，HBSAg是HBV感染的标志，但由于基因变异或低水平表达，用常规酶联免疫法很难检出，使用TRF能检出血清中的2.5Dane颗粒/ml提高阳性率，是早期诊断HBV的最直接的依据。用于乙肝病人的疗效监测也比常规的酶联免疫法提高了灵敏度。HBEAg出现提示病毒复血清具传染性。但血清出现抗HBe后，血液中病毒可能减少，并没完全消失，TRF能够准确定量患者血清中的DNA，为临床医生判断患者的病情提供了可靠的依据。现在TRF以其灵

6、敏度高，特异性强的优点被临床医生普遍用于观察病原体的复制情况及病程，患者及标本传染性强弱，抗病毒治疗的疗效观察，提高早期的诊断率和计划免疫等方面起到了重要作用。参考文献[1]朱沛轩.PCR检验技术[M]，成都：四川大学出版社，1995：75-80.3