使用100的水相流动相与AgilentZORBAXEclipsePlus苯基己基柱和其他ZORBAX苯基

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1、使用100%的水相流动相与AgilentZORBAXEclipsePlus苯基己基柱和其他ZORBAX苯基柱分析极性化合物应用报告药品和食品作者摘要WilliamJ.Long,AnneE.Brooks,使用高效液相色谱法分析极性化合物（如酸或碱），通常需要用到离子对试剂或亲水作用andWilliamBiazzo（HILIC）色谱柱。本研究中，证明了在苯基柱上使用100%水相流动相不会发生固定相塌AgilentTechnologies,Inc.陷。本文研究了不同的AgilentZORBAX苯基固定相（StableBondSB-苯基、EclipseXDB-2850Ce

2、ntervilleRoad苯基和EclipsePlus苯基-己基）对于脂肪酸和儿茶酚胺类（碱性化合物）的选择性。另外，Wilmington,DE19808这些化合物的选择性差异进一步显示了流动相添加剂的作用。USA前言ZORBAX色谱柱•EclipsePlus苯基-己基柱4.6mm×100mm,5µm(部件号使用反相液相色谱法通常很难对极性化合物（如酸或碱）进行分959996-912)离。在高pH条件下，碱性化合物由于不带电荷而容易得到保留。然而，有些情况下，样品中可能存在高pH条件下不易分离的其•Eclipse苯基柱4.6mm×100mm,5µm（定制）他化合物

3、。另一种可能的解决办法是使用离子对试剂以促进保留。•StableBond（稳定键合）苯基柱4.6mm×100mm,5µm但是，一般离子对试剂不适用于质谱仪。酸性化合物也是难以分（定制）离的样品，甚至很难产生保留行为。通常，有必要在低于化合物•EclipsePlus苯基-己基柱4.6mm×150mm,3.5µm(部件号pKa值的条件下工作，此时化合物完全质子化（不带电荷），并且959961-912)要求降低流动相中的有机相含量[1]。对于如C8或C18固定相等烷基色谱柱，使用有机相比例较低的流动相时，存在保留行为差•Eclipse苯基柱4.6mm×150mm,3.5

4、µm(部件号963967-或不易重现的问题。苯基色谱柱的一个独有特性是不易产生“反912)湿润”现象（或称固定相塌陷）[2]。当使用100%水相流动相时，•StableBond苯基柱4.6mm×150mm,3.5µm(部件号苯基柱可能是个不错的选择。本文将给出在100%水相条件下对863953-912)碱性和酸性化合物的分离结果。化学试剂及材料碱性化合物儿茶酚胺是一类神经递质。这类物质缺乏或过多都可18MΩMilli-Q纯水现场制备。甲酸、三氟乙酸（TFA）和乙酸购能改变对身体功能的控制。已有研究表明儿茶酚胺水平的改变与自SigmaAldrich(Bellfont

5、e,PA)。儿茶酚胺类化合物肾上腺素、去某些病理状态的诊断有关[3]。甲肾上腺素、多巴胺、左旋多巴和酪氨酸也购自SigmaAldrich酸及其盐类在食品中应用广泛，包括以下功能：调味，以提供理(Bellfonte,PA)，将其分别用水制成1mg/mL的溶液后混合成最想的味道；控制pH值，延缓微生物生长；螯合可导致脂肪氧化终浓度为0.2mg/mL的溶液。L-(+)-酒石酸、DL-苹果酸、DL-乳的金属离子（铜，铁）；减少某些水果和蔬菜的颜色和纹理变化；酸、乙酸、柠檬酸和丙酸分别用水溶解并制成1mg/mL的溶液，然以及通过改变果胶或蛋白质制成的凝胶以改变食品的质地[4

6、]。后混合成最终浓度为0.2mg/mL的溶液。所有化合物分别单独进样，以确定峰位和杂质。这些化合物的结构和pKa值见图1。实验部分OHOH在Agilent1200系列高分离快速液相色谱（RRLC）系统上运行HOHOHOHPLC分析：HNNH2NH2HCOHHOHO3•G1312BSL型二元泵，流动相A通道仅有水中的流动相改性剂ะฉ၇໎ඁोะฉ၇໎ܠәӃpKa=8.55pKa=8.4pKa=8.89发生变化，流速1mL/min•1376CSL型自动液体进样器（ALS），进样量5µLOHOHOOH•G1316BSL型柱温箱，柱温25°CHNH2OHHO•G1316C二

7、极管阵列检测器（DAD）以及G1315-60024微量H2NO流通池（5mm光程,6µL容量），儿茶酚胺的检测波长设置为ાҽ໗ፑ჉ܠә268,4和360,50nm；酸性化合物的检测波长设置为220,4和pKa=10.1pKa=8.72360,50nm图1a.儿茶酚胺类化合物的结构式及pKa2OHOOOHOO著的例外是酪氨酸，在苯基-己基柱上的保留稍有增强，可能的原HOOHH3C因是由于它的取代基较长，或是碳载率较高（9.5vs.7%）。CH3HOOHH3COHOOHOOHStableBondSB-苯基柱虽然含有暴露的硅醇基，但是由于其保护৶็໗೛ࡕ໗ළ໗ᅚ໗基团较

8、大，因此仍