胆囊胆固醇结石病人肝组织MDR3mRNA表达的半定量研究

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1、中国医科大学硕士学位论文胆囊胆固醇结石病人肝组织MDR3mRNA表达的半定量研究姓名：隋春阳申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：郭仁宣20030301中文摘要前言、一腮囊胆圈醇结石是～种常见的消化系统疾病。目前的流行瘸学谲磷研究裘晴，艟固醇结石与家族遗传有关。疆石的形成可能滚予笺杂翦环境．终爱霸潦不鼷了的多基因作爨。疆囊疆嬲醇结石癍表现为胆汁中腮固醇的内环境的失衡，即胆圈醇柱胆汁中溶解的生瑾生诧～平衡被打熬。艇汗中醣磷脂，主要是辩磷囊在蘧泞中与腿汁酸攀Ⅱ驵隐醇分子构成微胶粒，并和胆圈醇组成微泡，它可以使镦胶粒增大，罐高艇盐携带髓黼醇的能力，同时也可赢接增加鼹匿酵在耱汁中转溶

2、解，濒黪照匿酵终热熬树篷两彤藏皱石。毽此，磷代谢的变化就可能成为胆石形成的危险因素。而目前的研究表鼷，MDR3与邸磷脂熬分泌有关。本实验鹭在邋遵应惩FiT—pCR戢方法对胆囊胆酵结石瘸人与胆囊非胆劂醇结石人的MDR3基因表达的对比来探讨MDR3在聪囊腿阐醇结石形成中静作用。，7蔡验材料标本亲源：实验缀为2002年—2∞3年疆囊锺鬻醇绩石患者的肝缝织14例，收集的样本均为熙囊手术的瘸人术中行肝穿刺褥得。对照纽为菲腮结石入的肝组织，其中l侧为胆囊癌肝侵润患者戆瘸旁歪常戆肝缓绞，l例搀器瘗瘗舅的歪常嚣缀织，墨3剿舞尸体的肝组织。祷测标本均鬣于一70℃冰箱保存。实驻经器：PCR扩潜仅；

3、{乐温离心税；匀装槐i毫濂铰；无菌撩撵台；离压锅；攫滋糖；凝步}分光光度计；各种微量扭撵器；烤箱。实验试剂：Trizol(invitrogen公司)，反转录试剂窳(promega公篙)，TagDNA聚会酶(牮美公霹)，蘸臻(华美≥，DNAmarker(华美)，戈水乙醇，异葱醇，DEPC，氯仿，Tris碱，EDTA，硼酸，蔗糖，溴酚蘸，浓硫酸，照铬酸钾，TEMED，过硫酸铵，硝酸，硝酸镶，福尔马林，穰酸镧，己黢，嚣涵，嚣稀鬣黢，警叉双瓣烯虢黢等试裁。实验方法i。组级慧致烈A提取2．逆转录PCR3。PCR反应殿：签定4．mRNA表达的半定量分析结象胆囊结石患者的肝组织中MDR3mR

4、NA的表达比非胆囊络石^--___；=h“—一一的入的肝缀织中的表达显著降低(P<0．01)。讨论多重瓣药《MDR)基毽壤予一大类P一耱蟹是(Pgp)超纂遴家族，大量购研究表明，MDR3(和他的小鼠的阅源慕因mdr2)分布在月于藤的籍纲藏膜的腻管滴上，MDR3PgP燕郛磷滕的跨膜转逶子。本秘究邋过对胆豳醇结石病人及非胆豳酵缋石人肝细胞的MDR3的mRNA表达的半定量分析发现，腿固醇缩石病人的肝细胞的MDR3mRNA麴表达低鼍：毒#翟溜群装石人褥，提示MDR3PgP在胆圈醇络石形成中懿到了～定的作用。南于MDR3PgP是卵磷脂的跨黢转运予，魏暴人肝缏胞中的MDR3mRNA的表达降

5、低将导致MDR3PgP的减少，因此也就会导致卵磷脂分泌的减少。丽卵磷脂是服汁中的重要成分，卵磷脂在胆汁中与照汁酸和胆阐醇分子构成徽获救，著黧隧露酵经成微泡，它可泼笈徽靛粒增大，提离胆盐携带胆圃醇的能力，嘲时也可直接增加胆圃醇在胆、汁中的溶蘩，以黼照匿酷终晶豹辑穗丽形成结磊。鼹汗巾的郛磷膳的减少载会茨腿泞巾憋疆翳孽妙卵磷臌的毙值增加，使胆固醇的洛艇减·2·少，从而为胆固醇结石的形成创造一个有利的环境。这同目前公认的胆汁中的胆固醇／卵磷脂的比值增高是胆固醇结石形成的一个重要因素的结论相一致。这与其他学者的研究结论相一致。胆固醇结石病人中肝细胞的MDtL3rnRNA的减少的原因我认为

6、可能有以下几个原因：第一，MDR3基因的变异。第二，MDR3基因调控的异常。由于本研究的样本较少，因此尚需要更多的研究来明确MDR3与胆结石形成的详细关系。一结论一、胆囊胆固醇病人的MDR3mRNA的表达降低。二、MDR3在胆囊胆固醇结石的形成过程中起作用关键词胆囊胆固醇结石．MDR371：yr—PCR卵磷脂·3·Semi—-quantitativeanalysisofMDR3genemRNAexpressionintheliverofcholelithiasispatientAbstractPrefaceCholesterolcholelithiasisisanexcepti

7、onallycommonandeco-nomicallysignificantdigestivedisease．Epidemiologicandfamilystud·iesindicatethatcholesterolgallstoneformationisinpartgeneticallydetermined．Cholesterolgallstonediseaserepresentsafailureof．biliar，vcholesterolhomeostasisinwhichthephy