调节性树突状细胞抑制CD8T细胞的增殖与活化及相关机制研究

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1、调节性树突状细胞抑制CD8+T细胞增殖与活化及相关机制研究调节性树突状细胞抑制CD8+T细胞增殖与活化及相关机制研究摘要作为目前所知的机体内功能最强的专职抗原提呈细胞(Antigen-presentingcell，APC)，树突状细胞(Dendriticcell，DC)在识别抗原、启动免疫应答或是诱导免疫耐受的过程中发挥着重要的作用。DC作为一种异质性的细胞群体，因存在的解剖部位和功能状态不同，分为许多种亚群。这些亚群在不同的成熟阶段可以呈现不同的表型，表达多种细胞因子，其功能也具有多样性。以往人们对DC的认识仅局限于

2、其激活免疫方面的功能，但近年来的大量研究证明了DC也具有负向调节免疫的功能并将这类DC称为调节性DC(RegulatoryDC)。本实验室在以往的研究中发现，曾被认为是终末分化细胞的成熟DC，在与脾脏基质细胞共培养后，可以进一步增殖，并且分化为一类新型的调节性树突状细胞，将其命名为“分化样树突状细胞”(Differentiateddendriticcells，diffDC)。该群DC可以通过分泌NO来抑制CD4+T细胞的增殖，但不会显著诱导调节性T细胞的产生。di肋C的发现，打破了以往人们对“终末分化细胞”的定义标准：

3、成熟DC在完成抗原提呈任务后在次级淋巴器官微环境作用下可以进一步增殖分化并被赋予新的生命与功能。T细胞是免疫系统中重要的效应性细胞。初始T细胞在树突状细胞及其他抗原提呈细胞的作用下识别相关抗原，并发生级联性扩增，激发抗原特异性的细胞免疫及体液免疫，从而在抗御病原体感染中发挥重要作用。其中，CD8+T细胞是机体细胞免疫的主要效应细胞。CD8+细胞毒性T细胞(eytotoxicTlymphocyte，CTL)是具有免疫杀伤效应的细胞亚群，可以特异性识别抗原，在MHCI类分子限制的条件下直接、连续与特异性地杀伤靶细胞。但是在

4、免疫应答中，效应性CD8+T细胞无限制的扩增必定会引发如自身免疫疾病等不良后果，因此，针对CD8+T细胞的免疫负向调控方面的研究就显得尤为重要。DC在CD8+T细胞的增殖与活化中如何发挥调控作用，其具体机制又是什么，目前尚不完全清楚。我们围绕着本实验室以往发现的调节性DC(diffDC)对CD8+T细胞的调控作用及其机制进行了研究。首先，我们研究了diffDC对OVA特异性CD8+T细胞的增殖、活化的影响，结果发现diffDC能够抑制CD8+T细胞的增殖与活化。之后，我们进一步对diffDC对CD8+T细胞产生抑制作用

5、的机制作了初步的探讨。第二军医大学硕士学位论文一．调节性树突状细胞抑制C1)8十T细胞的增殖与活化在本部分实验中，我们研究了调节性树突状细胞对CD8+T细胞功能的调控作用。OT-I转基因小鼠来源的CD8+T细胞能特异性识别OVA257．2“多肽，是体外验证单一抗原肽特异性抗原提呈反应的良好反应细胞。我们采用OT-I小鼠来源的CD8+T细胞作为反应细胞，C57BL／6(H一2Kb)dx鼠来源的荷载OVA257．2“多肽的DC作为刺激细胞。为检测dittDC在该体系中的功能，我们将不同比例的diffDC加入到共培养体系(m

6、aDC／CD8)中，结果显示，diftDC显著抑制了由成熟DC(matureDC，maDC)诱导的CD8+T细胞的增殖，并且此种抑制作用呈diffDC细胞数量依赖性。采用CFSE标记的CD8+T细胞也得到同样的实验结果。分析细胞周期状况也发现类似的实验结果：在共培养体系内加入diffDC后，CD8+T细胞中处于细胞周期活跃期的细胞比例减少。这些结果表明diffDC抑制了CD8+T细胞的分裂增殖。在对上述共培养体系中的CD8+T细胞的活化表型及培养上清中存在的细胞因子进行分析时，我们发现diffDC抑制了CD8+T细胞活

7、化表型CD25的上调，并且下调了CD8+T细胞CD62L的表达水平。CD8+T分泌的细胞因子IL．2也有所降低。我们还利用实时定量PCR检测了共培养后的CD8+T细胞内颗粒酶B和穿孔素的表达水平，结果发现共培养体系中加入diffDC后，CD8+T细胞表达的颗粒酶B和穿孔素显著降低。这些结果表明diftDC抑制了CD8+T细胞的活化。调节性T细胞最显著的功能特点在于抑制其他T细胞在接受抗原刺激时的增殖。那么，diffDC是否可以通过诱导调节性T细胞产生从而抑制CD8+T的增殖活化呢?我们检测了diffDC诱导CDl22+

8、CD8+调节性T细胞产生的能力，结果发现，diffDC并不能诱导CDl22+CD8+调节性T细胞产生。以上结果提示，diffDC对特异性CD8+T细胞的增殖与活化可以起到抑制作用。此抑制作用很可能使CD8+T细胞保持一种相对耐受的免疫状态，从而维持免疫系统的平衡与稳定。二．调节性树突状细胞抑制CI)8+T细胞增殖与活化的机制研究在