层析柱填料装填指南(中文)

《层析柱填料装填指南(中文)》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、层析工艺树脂填料TOYOPEARL和TSK-GEL5PW的装填指南目录一、层析柱的装填11.装填前的准备工作1a.装填的一般考虑1b.小颗粒的去除1c.缓冲液平衡2d.匀浆准备22.装填步骤3a.恒流速/半恒压装填法4b.可供选择的装填方法53.平衡与柱效评价6二、层析柱的操作71.柱层析7a.分子尺寸排阻层析（SEC）7b.离子交换层析（IEC）8c.疏水反应层析（HIC）8d.亲和层析（AFC）82.填料的清洗93.填料的保存104.灭菌/热原的去除/防腐剂的清除/柱筛板10关于TOYOPEARL和

2、TSK-GEL5PW的简介填料，将其搅拌成悬浮液（请不要使用磁力搅拌器，这会磨碎树脂填料并产生小颗粒）。一旦成为悬浮液TOYOPEARL和TSK-GEL5PW大孔树脂型填料应用后，立刻将需要量的悬浮液（大概4体积的悬浮液=3于生物分子层析工艺，非常适合实验室和工业级大规体积的树脂填料）倒入某个容器内，容器的体积应不模生产中球状蛋白、多肽、核酸以及其他生化衍生物小于需要装柱填料体积的4倍。加入蒸馏水或者缓冲的分离纯化。这种树脂型填料为改性的聚甲基丙烯酸液至4倍填料体积，并一直保持搅拌。酯，由于醚及羟基的存

3、在使其具有亲水性的表面，并且具有了更好的耐压性能、流动特性及pH稳定性。举例：5L树脂填料（装柱需要量）=7~8L悬浮液一、层析柱的装填（65~70%匀浆浓度）因此，您至少需要准备20L的容器。（2）静置匀浆液静置时间取决于容器的直径、匀浆溶剂和填料的粒径大小。TOYOPEARL和TSK-GEL5PW填料用水匀浆时，平均静置时间如下。TOYOPEARLCoarseC级：100μm15-30分钟MediumM级：65μm30-45分钟FineF级：45μm45-60分钟SuperfineS级：35μm60

4、-90分钟图1.装填所需要的装置TSK-GEL5PW30μm90-120分钟1.装填前的准备工作20μm>120分钟a.TOYOPEARL和TSK-GEL5PW装填的一般考虑（3）一旦填料静置完成后，小心倒出表面的悬浮液。TOYOPEARL的装填压力最好为0.5~3bar（7~45psi）；TSK-GEL5PW的装填压力最好为3~10bar（45~140psi）。尽管TOYOPEARL和TSK-GEL5PW填料也可以通过重力沉降法进行装填，但这并不值得提倡。TOYOPEARL的装填压力不应过高（<5ba

5、r），TSK-GEL5PW的装填压力不应超过20bar。成功装填TOYOPEARL和TSK-GEL5PW所需要的图2.倒出表面的悬浮液图3.再次悬浮设备有（参照图1）：泵（HPLC或蠕动泵）、压力表、水平仪、玻璃/聚丙烯酸/PEEK或不锈钢层析柱、储槽（4）加入3倍填料体积的蒸馏水或者缓冲液，轻轻在（可选）等。填料表面搅拌使其重新悬浮。请不要使用磁力搅拌器，这会磨碎树脂填料并产生小颗粒。b.小颗粒的去除（我们建议最好去除小颗粒）在匀浆后的胶体中所存在的小颗粒会阻塞筛板或烧结（5）重复步骤（3）和步骤（4

6、）至少3次以上，直到板，最终会导致整个柱子的压降增大。通过下列过程悬浮液不再浑浊。可将匀浆后胶体中所存在的小颗粒去除。在去除小颗粒时的最后一次步骤中可加入装填缓冲液（参见c.（1）通过一根搅拌棒或桨激烈搅拌包装容器内的树脂缓冲液平衡）进行填料的平衡，如此可节约时间。-1-c.缓冲液平衡液，并将其倒入一个预先准备的量筒。（参照图4）对于所有的TOYOPEARL和TSK-GEL树脂填料，我（2）将浆液静置过夜（>12小时），以便获得最佳装们建议装填时使用高离子强度的缓冲溶液。尽管这些填效果。填料可以用水装填

7、，但相对于用同样装填方法而使用盐溶液作为缓冲液的层析柱而言，塔板数较低并且不对称性因子较高。对于疏水层析柱用水装填时，相对于高离子强度的缓冲溶液，更容易在柱内壁形成沟槽。这些沟槽的存在非但不是必须的，更会对柱子的性能造成不良影响。当选择装填缓冲液时，最好根据经验来选择，因为根据您特定的应用而选择最优化的填装缓冲液是最为合适的。总的来说，分离纯化步骤（包括清洗和消毒步骤）中将使用到的最高离子强度的流动相，是装填缓冲液的首选。一些常见的装填缓冲液请参见表1。表1.典型的装填缓冲溶液分子尺寸排阻（SEC）To

8、yopearlHW-40,HW-50,0.1MNa2SO4,NaNO3或HW-55,HW-65,HW-75NaCl溶于50mM磷酸盐或Tris缓冲液图4.静置中的填料浆液离子交换（IEC）ToyopearlDEAE,QAE,SuperQ,1MNaCl溶于50mM磷酸（3）对于TOYOPEARL树脂填料，确定静置胶体积CM,SP,MegCapSP-550盐,Tris或醋酸盐缓冲液后，加入或去除装柱缓冲液，以便将匀浆液浓度调节至30~50%；对