猪伪狂犬病毒变异株分离鉴定及免疫抗体检测

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1、分类号：Ｓ８５单位代码：１０１８３研究生学号：２０１３８５Ｋ００８密级：公开吉林大学硕士学位论文专业ｒ学位（）猪伪狂犬病毒变异株分离鉴定及免疫抗体检测Ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｏｒｃｉｎｅｓｅｕｄｏｒａｂｅｓｐｐｉｖｉｒｕｓｍｕｔａｎｔａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌａｎｔｉｂｏｄｙ作者姓名：李振伟类别：兽医硕士领域（方向）：兽医指导教师：丁壮教授培养单位：动物医学学院２０１８年１２月未经本论文

2、作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则应承担侵权的法律责任。，吉林大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本

3、人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：２０１８年１２月６日猪伪狂犬病毒变异株分离鉴定及免疫抗体检测Isolationandcharacterizationofaporcinepseudorabiesvirusmutantanddetectionofimmunologicalantibody作者姓名：李振伟领域（方向）：兽医指导教师：丁壮教授类别：兽医硕士答辩日期：2018年12月6日II摘要本研究从河南某发病猪场的发病仔猪脑组织中成功分离到一株伪狂犬病毒，对该病毒进行了鉴定，确定为伪狂犬病毒变

4、异株，命名为HN2012株，并对其进行了gE基因组的扩增以及遗传进化分析，同时对HN2012株基因缺失疫苗（gE-、gE-/gG-）进行了抗体检测以及攻毒保护效果进行初步评价。1、伪狂犬病毒变异株的分离鉴定以及遗传进化分析将病料组织上清液接种到BHK-21细胞上，培养36h后，细胞开始出现肿胀、变圆、聚集、出现合胞体等明显的病变。在经过3次克隆纯化的病毒液在BHK-21细胞上培养可以测得TCID-7.57/0.1ml。将病毒液接种昆明小鼠、家兔、仔50为10猪等实验动物，均出现典型的伪狂犬症状。gE氨基酸序列分析对比结果表明，HN

5、2012与其它毒株同源性为94.82%-99.83%。其中与国内分离株同源性为97.07%-99.83%，与国外分离毒株同源性为94.82%-96.03%，2012年以后分离毒株同源性为99.14%-99.83%。HN2012与其它毒株序列出现1-30不等的变异。以上结果表明国内分离的PRV毒株已经明显的划分为两个亚群：2012年前分离毒株亚群和2012年后分离毒株亚群。该结果为今后猪伪狂犬病毒疫苗株的选择提供了有益的参考。2、疫苗效力的检验疫苗效力实验通过免疫昆明小鼠后攻毒HN2012株来对三种疫苗效力进行评价，根据兽用生物制品

6、质量标准汇编（2011）中的猪伪狂犬病油乳剂灭活疫苗的效力检验要求：对照组全部死亡，实验结果成立，实验组二免保护率应至少达到70%，该疫苗的效力检验合格。实验结果表明：这三种疫苗的二免保护率全部高于70%，所以三种疫苗效力检验全部合格。根据《兽药质量标准》（2017年版）中猪伪狂犬病灭活疫苗效力检验规定，检验gE-和gE-/gG-对靶动物的效力。实验结果表明两种基因工程疫苗株免疫猪血清中和指数均大于316，结果判定合格,因此两株基因缺失灭活疫苗效力检验都符合国家《兽药质量标准》检验标准。综上所述，本研究检验的猪伪狂犬病毒变异株HN

7、2012的两株基因工程疫苗株都具有良好的免疫保护效果，为我国猪伪狂犬I病防控和疫苗株选择提供积极的数据支持。关键词：伪狂犬病毒；变异；分离鉴定.IIAbstractApseudorabiesvirusstrainwassuccessfullyisolatedfromthebraintissueofpigsinapigfarminHenanProvince.ThestrainnamedHN2012wasidentifiedasamutantstrainbygEgeneamplificationandgeneticevolutiona

8、nalysis.Meanwhile,theprotectiverateofgeneknocking-outvaccines(gE-andgE-/gG-)challengedwithHN2012wasevaluatedbyantibodytestsa