家畜繁殖学6.2人工受精

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1、三、稀释液的种类和配置（一）稀释液的种类1、现用稀释液奶类和等渗糖类为主。2、常温保存稀释液用于常温保存精液，pH较低。3、低温保存稀释液用于低温保存精液，含有卵黄和奶类等抗冷休克物质。4、冷冻保存稀释液用于冷冻保存精液，含抗冻物质如甘油、DMSO。（二）稀释液的配制1、各种成分的准备（1）蒸馏水：现制、灭菌。（2）化学药品：成分要纯净，溶解过滤后消毒，高温变性药品应用细菌滤膜过滤。（3）奶类：新鲜，不含其它物质。于（90~95℃）水浴10min，去除奶皮。（4）卵黄：取自新鲜鸡蛋，用前对蛋壳消毒。（5）抗生

2、素、酶类、激素、维生素等：于稀释液消毒冷却后加入。2、配制稀释液注意事项（书P155）（1）所用物品认真清、消毒、干燥；（2）如配制液状稀释液，最好现用现配，不要长时间保存（预混除外）。四、精液稀释方法与稀释倍数（一）精液稀释方法1、新采集的精液于30℃稀释，防止精子冷休克；2、采精后及时检查、稀释，时间长后精子容易死亡；3、稀释液与精液温度应该一致；4、稀释时，将稀释液沿容器壁缓慢倒入精液，高倍稀释时分次进行；5、稀释后立即镜检活力，以确保操作正确。（二）稀释倍数稀释倍数=稀释液的量/精液量如何精确计算一份

3、精液的稀释倍数？首先要考虑以下几个因素：猪1、该份精液总量250ml2、精子密度2亿/ml3、有效精子数（保存后使用前精子活率）0.64、每次输入有效精子数10亿5、每次输精量20ml该份精液的有效精子数：250ml×2×0.6=300亿则分成的份数：300亿/10亿=30份则稀释后总量：30×20=600ml则稀释倍数：600-250/250=1.4现行的精液保存方式有三种：常温保存（15-25℃）低温保存（0-5℃）冷冻保存（-79℃或-196℃）第五节精液的保存Section5SemenStorage液

4、态保存固态保存一、常温保存（15-25℃），变温保存1、原理：是利用一定范围的酸性环境，抑制精子的活动，使精子保持可逆的静止状态而不丧失受精能力。2、稀释液：（1）能量物：如葡萄糖；（2）缓冲体系：如柠檬酸钠、碳酸氢钠；（3）抗生素：如青、链霉素等。3、方法：隔水降温。天热时，尽可能降低保存温度如放入水井、水缸，天冷时，放在有暖气的室内。适合猪精液保存（15～17℃）二、低温保存（0-5℃）1、原理：利用较低的温度来减弱精子的活动和代谢，从而延长精子的生命。2、低温保存稀释液：除室温保存液应具有的成分外（不充

5、CO2），在牛用的稀释液还需用加卵黄或牛奶。为何要添加？3、保存前的处理（1）稀释分装：低温保存的精液通常用玻璃或塑料瓶分装，瓶内尽量不留空气，然后封口;（2）降温处理：通常按0.2℃/min降至保存温度;（3）保存方法：牛羊精液置于0~5℃，猪精液须特殊改造的冰箱或用泡沫盒内放冰块，精液用一块泡沫垫在上面；（看后图）（4）低温保存精液的利用：低温保存的精液在使用前应该用水浴升温至30℃。4、液态精液的运输（1）包装好、做好标记（种类、品种、畜号、时间）；（2）运输中避光、防震并保持温度。三、精液冷冻保存(-

6、79℃或-196℃)定义：是利用液态氮（-196℃）或干冰（-79℃），作为冷源，将精子和精液冷冻成固体，并在液态氮或干冰中作超低温永久保存。意义（熟悉）：（１）提高优良种♂的配种效能；（２）便于冷冻精液的自动化生产；（３）便于引种；（４）加快改良和育种；（５）推进繁殖新技术的应用；（６）建立动物基因库。（一）精液冷冻保存原理目前关于精液冷冻的原理普遍倾向于玻璃化学说。原理：利用超低温使精液和精子快速冷冻，快速越过形成冰晶的温度范围（0-60℃）、精液或精子中的水分不形成冰晶，而是形成玻璃化。同时在抗冻剂的存

7、在下使精子免受冻伤，在温度上升至体温精液解冻后精子能够保持完整的形态结构、功能和受精能力。液态→固态结晶态：缓慢降温形成。水分子有序形成冰晶对精子有害：机械和渗透压损伤。玻璃态：快速降温形成。水分子无序形成玻璃样的超微粒结晶，对精子无害。（0～-60℃）（-15～-25℃）（-60～-250℃）玻璃化是可逆的，不稳定的，当缓慢升温时又可能形成冰晶化。1、冷冻时细胞的损伤冰晶：在0～-60℃低温区，缓慢降温条件下形成的，降温越慢，冰晶越大，-15～-25℃对精子危害最大。冰晶的形成对精子造成的机械损伤和渗透压损

8、伤是引起精子死亡的主要物理因素。玻璃化：在-60～-250℃超低温区，从冰晶化区域内开始，就快速降温，迅速越过冰晶化进入玻璃化阶段，此阶段对精子无害。2、添加冷冻保护剂（甘油，DMSO等）作用：增强精子抗冻能力，并对防止冰晶发生起到重要作用。（二）精液冷冻保存稀释液除与精液低温保存液相同外，尚需用加抗冻剂。1、牛用：主要有卵黄-柠檬酸钠-甘油液，卵黄-糖类-甘油液，奶类-甘油液等3种。甘油浓度以5%