皱盖疣柄牛肝菌多糖结构分析及生物活性研究

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1、StudyonStructureandBioactivitiesofPolysaccaridesfromLeccinumrugosicepsADissertationSubmittedfortheDegreeofMasterCandidate：FangDongSupervisor：AssociateProf.JianChenSouthChinaUniversityofTechnologyGuangzhou,China分类号：TQ941学校代号：10561学号：201520119863华南理工大学硕士学位论文皱盖疣柄牛肝菌多糖结构分析及生

2、物活性研究作者姓名：董芳指导教师姓名、职称：陈健副教授申请学位级别：工学硕士学科专业名称：制糖工程研究方向：天然产物分离纯化论文提交日期：2018年6月7日论文答辩日期：2018年6月4日学位授予单位：华南理工大学学位授予日期：年月日答辩委员会成员：主席：吴玉萍委员：黄泽波姜建国陈健王兆梅摘要皱盖疣柄牛肝菌（Leccinumrugosiceps）又名虎皮牛肝菌，隶属于担子菌门（Basidiomycota）伞菌目（Agaricales）牛肝菌科（Boletaceae）疣柄牛肝菌属（Leccinum），是一种丛生的药食两用根菌。目前对于皱盖

3、疣柄牛肝菌的研究主要集中在阴离子、金属等成分分析，对于其多糖的研究较少。本课题展开了对皱盖疣柄牛肝菌多糖进行提取、分离纯化、结构鉴定以及生物活性等方面的研究。主要研究结果如下：（1）利用湿法打浆提取皱盖疣柄牛肝菌粗多糖，用单因素实验和响应面分析优化提取工艺，得到最佳提取工艺条件为：料液比1:35，温度80℃，打浆时间7min，重复3次，得到皱盖疣柄牛肝菌粗多糖的实际得率为4.58%，优于传统热水浸提法提取多糖。（2）皱盖疣柄牛肝菌粗多糖，经脱色、Sevage脱蛋白、浓缩、透析等步骤，得到皱盖疣柄牛肝菌粗多糖（LR）。LR经DEAE-52

4、柱层析得到两种组分相对均一的杂多糖LR-I、LR-III和一种混合多糖LR-II，质量分别占上样量的17.17%、46.40%、19.45%。多糖LR-I、LR-III经凝胶渗透色谱和SephadexG-100柱层析洗脱分析鉴定其为组分相对均一的纯化多糖，重均分子量Mw分别为1.4×104Da、1.6×104Da。对皱盖疣柄牛肝菌纯化多糖LR-I、LR-II及LR-III进行了理化性质分析，结果表明LR-I为米白色蓬松絮状物质，总糖含量47.71%，蛋白质含量0.03%，糖醛酸含量4.31%；LR-II为米白色蓬松絮状物质，总糖含量86

5、.45%，蛋白质含量0.17%，糖醛酸含量9.50%；LR-III为淡黄色蓬松絮状物质，总糖含量59.90%，蛋白质含量0.49%，糖醛酸含量10.00%，均不含可溶性淀粉和核酸。（3）对LR-I、LR-III进行结构分析，结果表明LR-I主要由葡萄糖醛酸、鼠李糖、岩藻糖，甘露糖，葡萄糖、半乳糖6种单糖组成，单糖的摩尔比是1:2.91:7.34:40.37:57.54:37.90。高碘酸氧化和Smith降解结果表明多糖LR-I含有1,2→（1,4→）、1→（1→6）和1,3→型糖苷键，三者的摩尔比为10.2:2.8:2.4。结合红外光谱

6、、核磁共振和甲基化等方法分析，多糖LR-I同时含有α和β两种构型糖残基，且α-构型含量大于β-构型的。可能是由1,6-D-葡萄糖、1,6-D-甘露糖构成主链，1,6-D-甘露糖、1,6-D-半乳糖和1,4-D-葡萄糖等构成支链；LR-III主要由葡萄糖醛酸、鼠李糖、岩藻糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖6种单糖组成，单糖的摩尔比是：1.46:1:3.41:8.07:56.80:15.71。高碘酸氧化和Smith降解结果表明多糖LR-III含有1,2→（1,4→）、1→（1→6）和1,3→型糖苷键，三者的摩尔比为6.4:1.4:7.6。结合红外光

7、谱、核磁共振和甲基化等方法分析，I多糖LR-III同时含有α和β两种构型糖残基，且β-构型含量大于α-构型的。可能是由1,3-D-葡萄糖和1-D-葡萄糖构成主链，1,6-D-半乳糖和1,2-D-甘露糖等构成支链。刚果红和扫描电镜实验表明多糖LR-I和LR-III均存在三螺旋空间构象，多糖LR-I主要呈片状，多糖LR-III主要为条状，结构更复杂。（4）皱盖疣柄牛肝菌多糖生物活性研究表明，皱盖疣柄牛肝菌多糖各组分均有一定的抗氧化活性，包括不同程度的Fe3+还原能力、清除DPPH自由基能力和清除ABTS+自由基能力。且在0.625~10mg

8、/mL浓度范围内，抗氧化活性与多糖的浓度成正相关。其中粗多糖LR各方面抗氧化活性均最高；皱盖疣柄牛肝菌多糖各组分均有不同程度的抑制HepG-2和MCF-7两种肿瘤细胞增殖的作用，在62.5~1000μg/m