产几丁质酶菌株的筛选及酶解产物鉴定

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1、粮油食品科技第21卷2013年第2期生物工程产几丁质酶菌株的筛选及酶解产物鉴定112谭海刚，李静，赵祥颖(1．青岛农业大学食品科学与工程学院，山东青岛266109;2．山东省食品发酵工程重点实验室，山东济南250013)摘要:几丁质酶是一种专一性降解几丁质的水解酶。在工业上，几丁质酶可用于制备功能性甲壳低聚糖。结合平板透明圈法和摇瓶发酵测酶活力的方法，从土壤中筛选到一株产几丁质酶的菌株L012，酶活力为0．75IU/mL;采用离子色谱法对菌株L012产几丁质酶的酶解产物进行分析，初步确定产物中有氨基葡萄糖、乙酰氨基葡萄糖以及聚合度小于10的寡糖。关键词:几丁质;几丁质酶;几丁

2、寡糖中图分类号:TS201．3文献标识码:A文章编号:1007－7561(2013)02－0065－03Screeningofthestrainsproducingchitinaseandidentificationofitshydrolysisproducts112TANHai－gang，LI－Jing，ZHAOXiang－ying(1．CollegeofFoodScience＆Engineering，QingdaoAgriculturalUniversity，QingdaoShandong266109;2．ShandongKeyLaboratoryofFood＆Ferme

3、ntationEngineering，JinanShandong250013)Abstract:Chitinaseisakindofhydrolasewhichdegradespecificallychitin．Chitinasehavebeenusedforpreparationoffunctionalchito－oligosaccharides．Combinedwithplateculturemethodandshake－flaskscreening，L012wasisolatedastheaimstrain，itsenzymeactivitywas0．75IU/mL．A

4、fteranalyzingthehydrolysisproductsofstrainL012byionchromatography，therewereglucosamine，eacetylglucosamineandoligosaccharideswiththedegreeofpolymerizationlessthan10．Keywords:chitin;chitinase;chitooligosaccharides几丁质酶专一性降解几丁质，水解得到的几丁1．2主要试剂寡糖、几丁二糖或N－乙酰葡萄糖胺在食品及药物胶体几丁质(Colloidalchitin):按SunChul

5、［2］方面有广泛的用途。几丁质酶(chitinase，EC3．4．1．Kang的方法制备，细粉几丁质:济南海得贝公司，［1］14)的酶源相当丰富，自从Benecke首次报道分离DNS试剂:参照文献［3］，磷酸缓冲液:参照文献到几丁质酶产生菌以来，发现微生物中细菌、放线［4］，其他试剂均为分析纯。菌、真菌、酵母及某些病毒都能够产生几丁质酶。不1．3培养基同来源的微生物的酶系有所不同，酶学性质差异较1．3．1富集培养基大。一般微生物产几丁质酶的酶系含有外切几丁质细粉几丁质2．5g/l，MgSO4·7H2O0．5g/l，酶、内切几丁质酶和几丁质二糖酶等。K2HPO40．7g/l，K

6、H2PO40．3g/l，FeSO4·7H2O本文采用平板透明圈法和摇瓶发酵相结合的方0．01g/l，pH7．0～7．2，121℃灭菌20min。法从土壤等样品中筛选到一株产几丁质酶的菌株，1．3．2平板分离培养基并用离子色谱法对该菌株酶解产物进行了分析、鉴胶体几丁质2．5g/l，K2HPO40．7g/l，KH2PO4定。0．3g/l，MgSO4·7H2O0．5g/l，FeSO4·7H2O0．011材料与方法g/l，琼脂15g/l，pH7．0，121℃灭菌20min。1．1土样1．3．3斜面培养基［4］。采自山东沿海等地区的土样。参考文献［4］1．3．4摇瓶筛选培养基细粉几丁质

7、10g/l，蛋白胨5g/l，酵母膏5g/l，收稿日期:2012－10－23KHPO0．7g/l，KHPO0．3g/l，MgSO·7HO0．5242442基金项目:山东省科技攻关计划项目(031010115)作者简介:谭海刚，1979年出生，男，山东临朐人，硕士．g/l，FeSO4·7H2O0．01g/l，ZnSO40．01g/l，pH通讯作者:李静，1981年出生，女，硕士，讲师．7．0，121℃灭菌20min。瑔瑥生物工程粮油食品科技第21卷2013年第2期1．4培养方法表1显示:菌株L012产酶活