鸡致病性大肠杆菌菌毛免疫原性及其FimA和FimH基因的研究

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1、山东农业大学硕士学位论文鸡致病性大肠杆菌菌毛免疫原性及其FimA和FimH基因的研究姓名：隋兆峰申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：赵宏坤;范伟兴2003.6.1ys口766』关于学位论文原创性和使用授权的声明本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体，均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的

2、全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。保密论文在解密后应遵守此规定。论文作者签名：鲫导师签名：j蚴日期：7(，￡，?、，、，歹山东农业大学硕士学位论文摘要从山东省分离到了107株鸡太肠杆菌，攻毒试验后，对其中16株高致病性大肠杆菌进行了血清型鉴定，主要血清型为078。通过血凝试验及PCR鉴定得知，这16株大肠杆菌主要表达I型菌毛。菌毛的表达受许多因素的影响，本研究从培养时间，培养方式等条件对菌毛表达的影响进行了探索，实验结果表明：培养72小时，菌毛可良好表达，振摇培养优于静止培养。菌毛提取方法的研究结果表

3、明，保温法优于搅拌法。提取的菌毛蛋白经SDS—PAGE测得其分子量约为17KDa。f选择3株表达I型菌毛的优势致病血清型鸡大肠杆菌作为试验株，分NYg"yx(024)、QD5(078)、QD2(02)。经增菌培养后提取菌毛制备成单价和多价2种菌毛油乳苗。分别于1日龄免疫一次和1日龄、14日龄免疫二次对鸡只进行免疫试验，并于4周龄攻毒。结果表明：用血清型O，s(QD5)制备的单价菌毛亚单位油乳苗能够有效保护其同源菌株的攻击，且接种免疫两次的效果明显优于一次免疫。交叉保护试验表明QD5(078)、QD9(02)和JX(024)之间存在着一定的交叉保护作用。多价菌毛亚

4、单位油乳苗免疫试验结果表明，由QD5(078)、QD9(02)和Ⅸ(024)菌株提取的菌毛制成的多价菌毛亚单位油乳苗能有效保护鸡分别抵抗3种同源菌株经气囊的攻击。参照Genbank收录的禽源大肠杆菌I型菌毛FimA基因序列，应用DNAStar软件分析，在其保守区设计了一对特异性引物。以煮沸法提取的16株鸡大肠杆菌基因组DNA为模板，进行PCR扩增。16个分离株中有14株(除QD6与FN外)扩增出特异的目的片段。选择其中2株(QD5与JX)的PCR产物进行了克隆和序列测定，并用DNAStar等软件分析测序结果，证明所扩增的产物为FimA片段，其核苷酸序列同源性较高

5、，为99．8％。分析抗原性图谱发现，二者的抗原峰图基本相同，抗原变异主要集中在135～145位氨基酸之间。不同禽源大肠杆菌菌毛FimA基因的同源性在92．9％～100％之间，变异较大。鸡致病性大肠杆菌I型菌毛免疫原性及其FimA和FimH基因的研究参照Genbank收录的禽源大肠杆菌I型菌毛厅mH基因序列，应用DNAStar软件分析，在其保守区设计了一对特异性引物。对3株表达I型菌毛的鸡致病性大肠杆菌的几m日基因进行了克隆并经测序得知，所扩增的产物为FimH片段，三者核苷酸序列之间虽有变异，但推导的氨基酸序列完全相同。三者的FimH基因序列与已发表的禽源大肠杆菌

6、的进行比较发现，其同源性在97．9～100％之间，表明FimH基因高度保守。＼／／。，／、／＼／＼／v／o／关键词：鸡y大肠杆菌；菌毛；免疫原性；FimA基因；用舰日基因<生至奎些查兰堕主兰垡笙兰——ImmunogenicityofType1FimbriaeofAvianPathogenicE．coliandCloningandNucleotideSequenceAnalysisofFimAandFimHGeneABSTRACT107avianpathogenicE．colistrainswereisolatedfromShandongprovince，ofwh

7、ich16highpathogeniCE．colistrainswereidentifiedforserumtype．andmoststrainsofserumtypewasOT8．ByhemagglutinationandPCRanalyze，16isolatesmainlyexpressedtypelDili．Theresultsshowedthatafter72hoursofincubation，pilicanbeexpressedwell．Shakercultureswereobservedtohaveanincreasedgrowthofpilicom

8、paredwiththe