Total RNA 提取

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1、TaKaRaCode：D9108ARNAisoPlus（TotalRNA提取试剂）说明书宝生物工程(大连)有限公司目录内容页码●制品说明1●制品组成1●保存和运输1●RNA提取实验前的准备1●实验操作2●RNA提取操作流程图3●实验例4●Troubleshooting5●参考文献6注意事项本制品中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会中毒、导致灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛时，应立即用大量的水冲洗以及前往医院治疗；接触到皮肤时，应立即用大量的聚乙二醇400（Po

2、lyethyleneglycol400）冲洗，严重时请前往医院治疗；使用本制品后感觉不舒服时请前往医院治疗。●制品说明RNAisoPlus是广谱型TotalRNA提取试剂。实验操作快速方便，颜色鲜明，便于分层。本制品可以从动物组织、植物材料、各种微生物、培养细胞等中提取TotalRNA。样品在RNAisoPlus中能够充分被裂解，在加入氯仿离心后，溶液会形成上清层、中间层和有机层（鲜红色下层），RNA分布在上清层中，收集上清层后，经异丙醇沉淀便可以回收得到TotalRNA。RNAisoPlus具有以下特性：1.广谱性强。可以从动物组织、植物材料、各种微生

3、物、培养细胞等中提取TotalRNA。2.纯度俱佳。提取的TotalRNA纯度高，基本不含蛋白质及基因组DNA，可以直接用于Northern杂交、斑点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RNA分解酶的保护分析、RT-PCR、构建cDNA文库等各种分子生物学实验。3.快速简便。实验操作快速方便，整个操作在一小时内便可完成。4.颜色鲜明。加入氯仿离心后，会形成无色的上清层和鲜红色的下层（有机层）。●制品组成RNAisoPlus*100ml*RNAisoPlus中含有强变性剂，应避免与皮肤、衣物等接触。若不小心接触到眼睛或皮肤时，请立即到医院进行处理。【试剂盒之外所

4、需准备试剂】◆氯仿◆异丙醇◆75%乙醇（DEPC处理水配制）◆RNase-free水（制备方法：使用RNase-free的玻璃瓶，向超纯水中加入DEPC至终浓度0.1%（v/v），过夜搅拌后，高温高压灭菌。）●保存和运输1.可以在室温下保存，建议在2-8℃下避光保存，效果更佳。2.可以在常温下运输。●RNA提取实验前的准备RNA制备的关键是要抑制细胞中的RNA分解酶和防止所用器具及试剂中的RNA分解酶的污染。因此，在实验中必须采取以下措施：戴一次性干净手套；使用RNA操作专用实验台；在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的RN

5、A分解酶的污染。【使用器具】尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前按下列方法进行处理。（1）用0.1%DEPC（焦碳酸二乙酯）水溶液在37℃下处理12小时。（2）然后在120℃下高压灭菌30分钟以除去残留的DEPC。RNA实验用的器具建议专门使用，不要用于其它实验。【试剂配制】用于RNA实验的试剂，须使用干热灭菌（180℃，60分钟）或使用上述方法进行DEPC水处理灭菌后的玻璃容器盛装（也可以使用RNA实验用的一次性塑料容器），使用的无菌水须用0.1%的DEPC处理后再进行高温高压灭菌。RNA实验用的试剂和无菌水都应专用，避免混用后交叉污染。-

6、1-●实验操作1.RNAisoPlus的使用量情况如下。样品量RNAisoPlus使用量（ml）210cm的贴壁培养细胞1710的悬浮培养细胞1～2100µl的白细胞250～100mg的普通组织样品150～100mg的特殊组织样品（肝、脾、骨及软骨等）215～30mg的植物材料（多糖和多酚含量不高的）12.实验样品的研磨和匀浆。A.贴壁培养细胞①倒出培养液，用1×PBS清洗一次。2②每10cm生长的培养细胞中加入1ml的RNAisoPlus，水平放置片刻，使裂解液均匀分布于细胞表面并裂解细胞，然后使用移液枪吹打细胞使其脱落（对于贴壁牢固的培养细胞可用细胞

7、刮勺剥离细胞）。③将内含细胞的裂解液转移至离心管中，用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。④室温静置5分钟。B.悬浮培养细胞①将悬浮培养细胞连同培养液一起倒入离心管中，8,000g4℃离心2分钟，弃上清。7②向每10个细胞中加入l～2ml的RNAisoPlus。③用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。④室温静置5分钟。C.动物组织、植物材料样品①将超低温冻结的RNA提取样品称量后迅速转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（无明显的可见颗粒，如果没有研磨彻底会影响RNA的收率和质量）。②对于普通的RNA提取样品，可

8、以向研钵中加入适量的RNAisoPlus，将研磨成粉末状的样品完全覆盖，然后室温