马铃薯甲虫病原细菌分离鉴定与生防菌筛选

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1、中国农业科学2012,45(18):3744-3754ScientiaAgriculturaSinicadoi:10.3864/j.issn.0578-1752.2012.18.007马铃薯甲虫病原细菌分离及生防菌的筛选与鉴定罗华东，严加林，余洋，谭万忠（西南大学植物保护学院外来入侵生物研究中心，重庆400716）摘要：【目的】分离筛选对马铃薯甲虫（Coloradopotatobeetle，CPB）具强致病性的细菌生防菌株并对其鉴定。【方法】从CPB虫体上分离病原细菌，利用几丁质酶和蛋白酶活性初步筛选致病菌株，然后通过室内和田间试验筛选出可导致CPB大量死亡的生防菌。根

2、据形态学、生理生化特性和16SrDNA序列分析等进行鉴定，确定生防菌株的分类学地位。【结果】从新疆CPB分布区采集的CPB发病成虫虫体上分离纯化获得126个细菌菌株，其中36个菌株对昆虫体壁几丁质和蛋白质具有降解活性。在室内马铃薯叶片饲养的CPB各龄幼虫和成虫上测试，11个菌株对1—2龄幼虫表现出不同程度致病力，在接种后1—3d始见幼虫死亡，处理后7d幼虫的累积死亡率达到21.0%—77.9%，所有菌株对2龄以上CPB的致病力不明显或无致病力。在田间种植的马铃薯植株上测试这11个致病菌株，处理后观察，CPB008、CPB012和CPB016等3个菌株在10d内对CPB的

3、累积致死率达到41.0%—49.9%；另外还有3个菌株对CPB的致死率也在21.1%以上。这6个菌株均为革兰氏阳性菌，从形态学和生理生化特性鉴定它们均属于芽孢杆菌（Bacillus），通过PCR扩增分别获得它们的16SrDNA序列并登录到NCBIGenBank中，由此分析比对，菌株CPB008、CPB012、CPB016和CPB111为苏云金芽孢杆菌（B.thuringiensis）；CPB072、CPB108为萎缩芽孢杆菌（B.atrophaeus）。【结论】筛选获得的3株苏云金芽孢杆菌（CPB008、CPB012、CPB016）对马铃薯甲虫致病性强，具有重要的应用潜

4、力。关键词：马铃薯甲虫；苏云金芽孢杆菌；萎缩芽孢杆菌；生物防治；杀虫效率Isolation,ScreeningandIdentificationofBacterialAgentsforBiologicalControlofColoradoPotatoBeetle(Leptinotarsadecemlineata)LUOHua-dong,YANJia-lin,YUYang,TANWan-zhong(ResearchInstituteofAlienInvasiveSpecies,CollegeofPlantProtection,SouthwestUniversity,Cho

5、ngqing400716)Abstract:【Objective】TheobjectiveofthisstudyistoisolateandscreenbacterialbiocontrolagentsagainstColoradopotatobeetle(CPB)(Leptinotarsadecemlineata).【Method】DiseasedCPBadultsampleswerecollectedfromXinjiangandbacterialisolateswereobtainedfromthesamples.Theseisolatesweretestedfo

6、rCPBpathogenicity.Highlyinsecticidalisolateswerescreenedthroughlaboratoryandfieldassaysandidentifiedmorphologicallyandmolecularly.【Result】Atotalof126bacterialisolateswereobtainedfromdiseasedadultsofCPBscollectedfromXinjiangAutonomousRegionofChinaand36isolatesshowedprotein-andchitin-degra

7、dingactivity.Amongtheseisolates,11infected1stinstarand2ndinstarCPBlarvaeandresultedinlethalratesof21.0%-77.9%within7daysafterinoculationwhentestedondetachedpotatoleavesinthelaboratory.The11infectiousisolateswereselectedforfieldtestsand6oftheminducedhighCPBmortalityrates.T