血细胞的计数

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1、血细胞的计数【目的要求】学习红细胞、白细胞计数的方法。【基本原理】血液中血细胞数的计算是使用血细胞计数板。而且要用适当的溶液将血液稀释后，放入计数板的计数室内，在显微镜下计算一定容积血液稀释液中的血细胞个数，再将所得结果换算为1mm3血液中的血细胞个数。【动物与器材】兔、血细胞计数板、血红蛋白吸管、1ml和5ml吸管、表面皿、显微镜、刺血针、酒精棉球、红细胞稀释液、白细胞稀释液、95%酒精、乙醚、1%氨水。【方法与步骤】1．采血及稀释用1ml吸管吸取0.38ml白细胞稀释液放入表面皿内备用，另用5ml吸管吸取3.98ml红细胞稀释液放入表面皿内备用。用酒精棉球消毒兔的耳缘静脉采血部位，用

2、刺血针刺破血管，让血液自然流出，擦去第一滴血，待流出第二滴血时，用血红蛋白吸血管吸血至刻度20mm3处，将血液吹入盛有白细胞稀释液的表面皿内，吸上清液冲洗沾在管壁上的血液。立即将吸管洗净和干燥备用。再用同样方法吸取血液至刻度20mm3处，并将血液吹入盛有红细胞稀释液的表面皿内，轻轻摇匀。2．血细胞计数板的结构计数板是一块特制的长方形厚玻璃板，板面的中部有4条直槽，内侧两槽中间有一条横槽把中部隔成二长方形的平台（图3-3）。此平台比整个玻璃板的平面低0.1mm，当放上盖玻片后，平台与盖玻片之间距离（即高度）为0.1mm。平台中心部分各以3mm长，3mm宽精确划分为9个大方格，称为计数室（图

3、3-4），每个大方格面积为1mm3，体积为0.1mm3。四角的大方格，又各分为16个中方格，适用于白细胞计数。中央的大方格则由双线划分为25个中方格，每个中方格面积为0.04mm3，体积为0.004mm3。每个中方格又各分成16个小方格，适用于红细胞计数。稀释后的血液滴入计数室前将表面皿摇振1-2min。将盖玻片放在计数板正中，用小吸管吸取摇匀的稀释血液，将一小滴血液滴在盖玻片边缘的玻片上，使稀释血液借毛细管现象而自动流入计数室内。如滴入过多，溢出并流入两侧深槽内，使盖玻片浮起，体积改变，会影响计数结果，需用滤纸片把多余的溶液吸出，以深槽内没有溶液为宜。如滴入溶液过少，经多次充液，易造成

4、气泡，应洗净计数室，干燥后重做。红细胞和白细胞的计数，各使用一计数室。3．计数血液稀释液滴入计数室后，须静置2-3min，然后在低倍显微镜下计数。计数白细胞时，数四角4个大方格的白细胞总数；计数红细胞时，数中央大方格的四角的4个中方格和中央的一个中方格（共5个中方格）的红细胞总数。计数时应循一定的路径，对横跨刻度上的血细胞，依照“数上不数下，数左不数右”的原则进行计数（图3-5）。计数白细胞时，如发现各大格的白细胞数目相差8个以上；计数红细胞时，如各中方格的红细胞数目相差20个以上，表示血细胞分布不均匀，必须把稀释液摇匀后重新计数。4．计算白细胞数：将4个大方格内数得白细胞总数乘以50，

5、即得每mm3血内的白细胞总数，因为：(1)稀释液0.38ml加入血20mm3（1ml=1cm3=1000mm3，故20mm33=0.02ml），使血液稀释20倍，换算成未稀释血时应乘以20。(2)计数四角上4个大方格内的白细胞总数，其容积为1×1×0.1×4=0.4mm3。换成每mm3时应乘以2.5。这样把4个大方格内数得的白细胞总数乘以50（即20×2.5=50）即为每mm3血内的白细胞总数。红细胞数：将中央大方格中的5个中方格内数得的红细胞总数乘以10，000，即得每mm3血内红细胞总数。因为：(1)稀释液3.98ml加入血20mm3（即0.02ml），使血液稀释200倍，换算成未稀

6、释血要乘以200。(2)在计数室内只计数0.02mm3（即1个中方格的容积为0.2×0.2×0.1=0.004mm3，5个中方格的容积为0.004×5=0.02mm3），换算成每mm3时应乘以50。这样把5个中方格内数得的红细胞总数乘以10，000（即200×50=10，000）即得每mm3血液内的红细胞总数。【思考题】小结在操作过程中，哪些因素可能影响计数的准确性？【附】一、仪器清洁法1．吸管洗涤法弃去吸管内的血液稀释液，然后重复吸入并吹出蒸馏水数次，再吸入与吹出95%酒精一次，以洗去管内水分。最后吸入与吹出乙醚一次。注意：这些步骤都不应用口吹吸，而用泵抽吸。如吸管内存有血凝块，可置于

7、1%氨水中浸泡，待血块溶解脱落后再用流水清洗，并按上述步骤洗涤。2．计数板及盖玻片洗涤法计数完毕，应立即用清水冲洗、晾干，然后用擦镜纸擦干净。二、血细胞稀释液配制法1．白细胞稀释液冰醋酸（破坏红细胞）1.5ml1%龙胆紫（染白细胞核，便于计数）1ml蒸馏水加至100ml2．红细胞稀释液NaCl（维持渗透压）0.5gNa2SO4（使溶液比重增加，红细胞均匀分布不易下沉）2.5gHgCl2（固定红细胞并防腐）0.25g蒸馏水加至100m