纸层析鉴定转安基作用

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1、生化实验教案与讲稿一、教案课程名称生物化学实验授课专业和班级2005级临床本科及心理学专业授课内容实验五纸层析鉴定转安基作用授课学时4学时授课地点分析实验室日期2006.11.20节次1、2、3、4节教学目的验证氨基酸的转氨基作用。初步掌握纸层析法分离和鉴定氨基酸的基本原理和技术。教学重点鉴定氨基酸的基本原理和技术。教学难点鉴定氨基酸的基本原理和纸层析原理。教具黑板、粉笔、实验材料、实验仪器等。教学方法小班讲课教学过程讲述实验原理15分钟讲述实验操作15分钟学生操作80分钟实验结果分析10分钟参考书籍（1）刘粤梅、朱怀荣主编《生物化学实验教程》（人

2、民卫生出版社）思考题或/及作业（1）氨基酸的一般分解代谢途径如何？（2）何谓氨基酸的转氨基作用。课后总结二、讲稿（一）实验目的：验证氨基酸的转氨基作用。初步掌握纸层析法分离和鉴定氨基酸的基本原理和技术。（二）实验原理：转安酶广泛分布在身体个组织器官中，在转安酶的作用下，将氨基酸的氨基转移到α-酮酸的酮基上。丙氨酸与α-酮戊二酸可以可逆反应生成丙酮酸和谷氨酸。用纸层析法来观察α-酮戊二酸与丙氨酸在肝脏谷丙转氨酶的催化作用下的转氨基作用。纸层析是以酚作为流动相，滤纸上吸附的水为固定相，在分离氨基酸时，由于氨基酸在此两相中的分配系数的不同，从同一位点展开

3、时，不同的氨基酸在滤纸上的移动速度不同，各有一定的迁移率RF。根据迁移率的不同，可鉴定被分离的氨基酸。（三）实验器材：1、试管及试管架2、研钵和钵杵、剪刀3、恒温水浴箱4、滤纸、吹风机、直尺、铅笔、5、小滴管、（四）实验试剂：磷酸缓冲液、0.1M的丙氨酸液、0.1Mα-酮戊二酸、0.1M谷氨酸、层析液、茚三酮液（五）操作1、取兔肝1克，放研钵中研磨，加入9ML的磷酸缓冲液，迅速研成匀浆。2、取干燥试管2支，编号，按下表加入肝匀浆及各种试剂：试剂(滴)对照管测定管肝匀浆1010温度及时间100℃、10分钟37℃、10分钟0．25%碘乙酸溶液551%谷

4、氨酸溶液10101%丙酮酸钠溶液1010温度及时间37℃、10分钟37℃、10分钟5%三氯醋酸溶液223、点样4、层析（45-60分钟）用铅笔画出溶剂前沿，用吹风机吹干5、喷入茚三酮，再吹干。观察滤纸上的颜色并量出色斑到点样中心的距离和溶剂前沿到点样处的距离。计算：RF＝色斑中心到点样中心的距离/溶剂前沿到点样处的距离(六)实验结果分析(七)实验小结