《血清ALT活性测定》PPT课件

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1、血清ALT活性测定吴占波、陈旻赉、刘仲春、陈军武实验目的生理作用单位意义测定方法临床意义卡门原理ALT丙氨酸+a-酮戊二酸丙酮酸+谷氨酸NADH+H乳酸脱氢酶NAD++乳酸1ml血清340nm波长1.0cm比色25C1min光密度下降0.001实验原理ALT丙氨酸+a-酮戊二酸丙酮酸+谷氨酸[OH]丙酮酸+2,4二硝基苯肼丙酮酸2,4二硝基苯腙+H2O反应30min在520nm试剂ALT底物液PH=7.4磷酸缓冲液丙酮酸标准液2，4-二硝基苯肼溶液0.4mol/LNaOH实验操作1.绘制标准曲线2.酶活性测定混匀，放置10分钟，以蒸馏水调零，用520nm波长比色，读取各观密度。各管的光密度

2、An减去0管（A0），以光密度差值（An-A0）为纵坐标，活性单位为横坐标。01234丙酮酸标准液（ml）00.050.10.150.2ALT底物试剂（ml）0.50.450.40.350.30.1M磷酸缓冲溶液PH=7.4(ml)0.10.10.10.10.1混匀，置37C水浴预温5分钟2,4-二硝基苯肼液（ml）0.50.50.50.50.5混匀，置37C水浴20分钟0.4mol/LNaOH(ml)55555相当于ALT活性（卡门氏单位）0285797150酶活性测定：去两只表明测定管T及对照管C,测定前将底物液在37C水浴中预温5min混匀，放置10min，用520nm波长比色，读数

3、，用AT-AC差标准曲线，及待测血清中ALT的酶活性参考值5~25卡测定管对照管血清（ml）0.1—ALT底物液（ml）0.50.5混匀，置37C水浴中保温30min2,4-二硝基苯肼液（ml）0.50.5混匀，置37C水浴中保温20min血清（ml）—0.10.4mol/LNaOH（ml）55临床意义在肝脏疾病时，ALT的浓度会升高，机体各组织都有，肝脏中丙氨酸代谢最旺盛，含量最多发病时活性和含量均升高葡萄糖6-磷酸葡萄糖甘油磷酸二羟丙酮磷酸戊糖途径脂肪磷酸烯醇式丙酮酸3-磷酸甘油醛脂肪酸丙酮酸非必须氨基酸非必需氨基酸乙酰辅酶A酮体草酰乙酸柠檬酸CO2延胡索酸a-酮戊二酸谷氨酸琥珀酸CO

4、2注意事项赖氏法标准曲线只到97卡门氏单位，启活性与吸光度有良好的线性关系，超过时，应将血清稀释测定A-酮戊二酸也能与2,4-二硝基苯肼产生苯腙，两种吸光度在520nm出吸光度差异大，空白管的吸光度应不超过0.015思考题1终止法2赖氏与卡门的联系与区别3标准对照法4影响准确性较大的试剂标准对照法测定管T对照管C标准管S空白管S标准液（ml）————0.1——血清（ml）0.1——————ALT底物液（ml）0.40.40.40.5PBS(ml)0.10.10.10.1混匀，37C,30min苯肼（ml）0.50.50.50.5混匀，37C,20min血清（ml）——0.1————NaOH

5、溶液(ml)5555谢谢！