环介导恒温扩增技术快速检测鼠疫耶尔森菌_冯娜.pdf

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1、868军事医学2015年11月第39卷第11期MilMedSci，Vol39，No11，Nov，2015环介导恒温扩增技术快速检测鼠疫耶尔森菌檭檭殐檭檭檭檭檭檭檭檭殐技术方法檭殐檭殐檭檭檭檭檭檭檭檭冯娜1，2，周亚洲2，范艳晓1，2，汪琼2，毕玉晶2，韩延平2，杨瑞馥2，周育森1，2，王效义1，2［摘要］目的建立简单、快速环介导恒温扩增技术(LAMP)检测鼠疫耶尔森菌的方法。方法基于鼠疫菌染色体上特异的核酸序列3a设计引物;应用浊度仪和目视法对反应结果进行检测;通过对鼠疫菌和其他近源菌同时进行检测评价方法的特异性;通过对不同稀释浓度的鼠疫菌DNA模板进行LAMP和PCＲ检测以确定方法的灵

2、敏度。结果用建立的LAMP法对与鼠疫菌近源30种其他菌株进行扩增，结果均为阴性，该方法具有很高的特异性。LAMP法检测鼠疫菌DNA的灵敏度可达到20pg，比常规PCＲ法高10倍。检测反应在25min以内完成。结论该方法具有快速、灵敏、特异、操作简单的特点，有望发展成为现场快速检测鼠疫菌的有效手段。［关键词］鼠疫耶尔森菌;环介导恒温扩增技术;检测［中图分类号］Ｒ378．61［文献标志码］A［文章编号］1674-9960(2015)11-0868-05DOI:10．7644/j．issn．1674-9960．2015．11．014Loop-mediatedisothermalamplifica

3、tionforquickdetectionofYersiniapestisFENGNa1，2，ZHOUYa-zhou2，FANYan-xiao1，2，WANGQiong2，BIYu-jing2，HANYan-ping2，2，1，2*，1，2*YANGＲui-fuZHOUYu-senWANGXiao-yi(1．AnhuiMedicalUniversity，Hefei230032，China;2．LaboratoryofAnalyticalMicrobiology，StateKeyLaboratoryofPathogenandBiosecurity，BeijingInstituteofMicr

4、obiologyandEpidemiology，Beijing100071，China)*Co-correspondingauthors，WANGXiao-yi，Tel:010-66948562，E-mail:wgenome@163．com;ZHOUYu-sen，Tel:010-66948490，E-mail:yszhou@bmi．ac．cn［Abstract］ObjectiveToestablishasimpleandquickloop-mediatedisothermalamplification(LAMP)methodfordetectionofYersiniapestis．Meth

5、odsLAMPPrimersweredesignedbasedonthespecificsequence3ainY．pestischromosome．LAMPreactionresultsweredetectedusingturbiditymeterorvisualmethod．ThespecificityoftheconstructedmethodwasevaluatedbydetectingY．pestisanditsclosely-relatedbacteria．ThedifferentdilutionDNAtemplatewasdetectedwithLAMPandPCＲtoeva

6、luatethesensitivityofthemethod．ＲesultsThirtystrainsofbacteriacloselyrelatedtoY．pestisweredetectedbytheconstructedLAMP，andalltheresultswerenegative，indicatingthatthemethodhadaveryhighspecificity．ThedetectionsensitivityofthisLAMPassaywas20pgofDNAperreaction，whichwasten-foldthatoftheregularPCＲ．Thedet

7、ectionreactionwascompletedin25min．ConclusionThisLAMPmethodisquick，sensitive，specificandsimple，whichisexpeckedtobecomeaneffectivemethodforrapiddetectionofY．pestisonthescene．［Keywords］Yersiniapestis;loop-mediatedis