《核酸的提取分离》PPT课件

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1、生化工艺学课件第五章核酸的提取分离第五章核酸的提取分离§5.1概述§5.2核酸的理化性质§5.3核酸的作用与用途§5.4动物脏器核酸的提取分离方法§5.5转移因子的制备§5.6辅酶A的提取§5.7复合辅酶的提取§5.8从啤酒酵母中提取RNA§5.1概述核酸（nucleicacid)核苷酸(nucleotide)磷酸(phosphoricacid)核苷(nucleoside)戊糖(pentose)碱基(base)组成核苷酸的碱基Fig.2-4TheprimarystructureofDNA.脱氧核糖核酸（DNA）主要

2、存在于细胞核的染色体中，核糖核酸（RNA）主要存在于细胞的微粒体中，各种生物体含有核酸的多少不同应用于临床的核酸及其衍生物类生化产品越来越多我国人工合成丙氨酸转移核糖核酸，76个核苷酸，与天然酵母丙氨酸核糖核酸具有相同的化学结构，有接受丙氨酸、将携带的丙氨酸掺入到蛋白质中的生物活力呈味核苷酸是目前国际上流行的新型鲜味剂，其学名为5－IMP（肌苷酸钠）、5－GMP（鸟苷酸钠）、I＋G（50％IMP＋50GMP），我国第三代鲜味剂鸡精的特点为：由鸡肉、鸡蛋、呈味核苷酸、水解蛋白粉、味精及多种调味料复合而成。核酸类的药物

3、主要是核苷酸、嘌呤及嘧啶类相关的衍生物保健品：某核酸公司宣称其产品具有增强基因自主修复能力，还能改善微循环、改善脑机能；促进新陈代谢、抗疲劳；提高免疫力；活化皮肤细胞、润肤美容。核酸在食品和药品领域中的应用？核酸工业的市场分析核酸药物产品的开发已有近70年历史。目前，日本是核酸产品的最大生产国，其年产量约7500吨，约占世界产量的90%；西方国家中，意大利也有核酸产品，但产量不是很大。近年来，韩国核酸产业兴起，主要为调味品。我国核酸产品的研究开发起步较早，并取得了令人瞩目的成就。然而目前我国核酸药物产品主要依靠进口

4、，仅ATP一项每年就从日本进口金额达八千万美元§5.2核酸的理化性质§5.2.1核酸的一般性质1、DNA分子与蛋白质分子、RNA相对分子质量？2、DNA白色纤维状固体，RNA白色粉末，均微溶于水，稀碱溶液中成盐后易溶于水，不溶于有机溶剂，但可溶于乙醇的水溶液，乙醇＞50％（w/w）时，DNA析出，当＞75％时，RNA也沉淀出来→溶解度差别分离≥106几千到百万几万到几百万盐溶液中溶解度差异提取RNA时NaCl盐溶液浓度仅为0.14mol/L即可而提取DNA时，需先用0.14mol/LNaCl将RNA除掉，再继续增加

5、NaCl浓度至1mol/L时才能够将DNA提取出来§5.2.1核酸的一般性质3、DNA极稀的溶液黏度极大，变性时黏度降低，pH超出5.6-10.9时，相对黏度突然降低4、可被酸、碱或酶水解成各种组分，用层析、电泳等方法分离，主要利用：RNA的磷酸酯键对碱敏感：室温，0.3~1mol/LKOH，24h，可将RNA完全水解，得到2’-或3’-核苷酸的混合物。★DNA抗碱水解★生理意义：DNA更稳定，遗传信息。RNA是DNA的信使，完成任务后迅速降解。§5.2.2核酸的紫外吸收性质嘌呤、嘧啶环→共轭双键→紫外吸收，核酸λ

6、max260nm附近，而λmin230nm1、鉴定纯度纯DNA的A260/A280≥1.8；纯RNA的A260/A280≥2.0若溶液中含有杂蛋白或苯酚，则A260/A280↓2、含量计算，吸光值为1.00时，相当于：50ug/mL双螺旋DNA或：40ug/mL单链DNA（或RNA）或：20ug/mL寡核苷酸DNA和RNA均在紫外光下有最高吸收峰，可采用OD260nm测定其浓度另一方面DNA和RNA含磷含糖，所以可通过糖含量及磷含量的测定方法间接表征核酸的含量RNA所含糖为核糖→苔黑酚法测定；DNA所含糖为脱氧核糖

7、→二苯胺法测定。含磷量测定时均需先经过消化将有机磷转变为无机磷才能测定，纯RNA含磷量为9％，而纯DNA含磷量为9.2%。§5.2.3核酸的变性和复性高温（热变性）、酸碱（pH小于4或大于11）及某些变性剂（尿素、盐酸胍、甲醛）能破坏核酸双螺旋区的氢键断裂，变成单链，不涉及共价键断裂。变性后的理化性质★DNA的变性是爆发式的，变性作用发生在一个很窄的温度范围内。粘度降低，浮力密度升高。二级结构改变，部分失活。260nm吸收值升高。★  增色效应与减色效应增色效应：在DNA的变性过程中，摩尔吸光系数增大减色效应：在D

8、NA的复性过程中，摩尔吸光系数减小。熔解温度（Tm）：★DNA的双螺旋结构失去一半时对应的温度。浓度50ug/mL时，双链DNAA260=1.00；完全变性（单链）A260=1.37当A260增加到最大增大值一半时，即1.185时，对应的温度即为Tm。DNA的Tm一般在82—95℃之间影响DNA的Tm值的因素1、DNA均一性：均一性高，变性的温度范围越窄，据