液相色谱法1－农药残留测定方法

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1、第五章农药残留测定方法学习指南观察思考课外阅读复习自测退出本章演示文稿本章目录辽农职院工程系质检中心Friday,October08,2021淋洗液色谱柱检测器数据处理第二节液相色谱仪本节首页退出本章一、GC与HPLC的比较本节首页退出本章二、流动相的基本要求保持色谱柱的稳定性，因而与固定相不互溶（延长柱寿命）不发生不可逆吸附有合适的pH值化学惰性—不与样品及固定相发生反应。本节首页退出本章UV：在紫外线区“透明”示差：折射率与溶剂有较大差异电化学检测器：电惰性。对样品有很强的溶解力。清洗与更换方便低价、毒性小、纯度高。1、适用于所选的检测器本节首页退出本章2.流动相的选择

2、有合适的理化性质（沸点、粘度等，尽可能小一些）合适的强度（分配系数要合适，简单样品可大，复杂样品要小）混合溶剂（有等度和梯度之分）极性合适（需根据溶剂的性质而定）本节首页退出本章3、流动相的物理参数溶解度参数（溶剂极性的量度）：与样品分配比有关，要适中。沸点：要低些，便于回收分离样品。粘度：柱效与粘度成反比，要求早在0.4～0.5cP。混合溶剂一般能降低粘度。本节首页退出本章4、混合溶剂可靠改变溶剂组成来调节溶剂的强度等，以适合不容的样品。等度淋洗：淋洗过程中溶剂组成不变，强度恒定，k值在10以内可得较好的分离。梯度淋洗：淋洗过程中溶剂组成随时间而变，一般使强度按程序增加，使

3、组分在最合适的k值处洗出。本节首页退出本章5、梯度淋洗使用于极性范围宽的混合物的分离。优点：提供限单位时间内的最大分离度。提高出峰的对称性减小峰宽降低检测本节首页退出本章问题：要用高纯试剂（贵）。可能在固定相上产生杂质富集，需再生处理（尤其是极性柱），可用10～30倍柱体积的溶剂淋洗。5、梯度淋洗本节首页退出本章三、液相色谱柱的保养柱的稳定性与固定相类型及使用情况有关。为了保持柱效、柱容量及渗透性，必须进行仔细地保养。是否会由于柱外效应，使分析柱的柱效明显下降？本节首页退出本章（一）、防止堵塞1、必须将流动相仔细地蒸馏、过滤。在流动相贮槽与柱之间，使用0.5μm孔径的过滤器。

4、水往往是一个重要的污染源。在水溶液流动相（如缓冲液）中，细菌容易生长，可能堵塞筛板。防止细菌生长的办法是加入抑制剂，如0.01%NaNO3。显然，抑制剂不能干扰分离和测定。本节首页退出本章（一）、防止堵塞2、在恒定压力下，发现流量减少，柱子可能部分堵塞。堵塞最容易发生在极窄的入口接头处以及入口、出口筛板处。堵塞后需要仔细拆洗，清除堵塞物，但必须防止较强的机械震动，防止用热手接触柱子，以扰动柱内的固定相层，使柱效发生变化。本节首页退出本章5．要防止反冲（流动相逆向流动），否则使固定相层位移，柱效下降。6．柱子两端用金属螺帽封闭，保存在纯净的有机溶剂中。应该将柱子保存在以下pH范

5、围内的水溶液流动相中：2

6、塔板数大大减少外，对k’值较大的组分，其柱效下降很少。本节首页退出本章三、检测器本节首页退出本章三、检测器紫外检测器UV-DETECTOR本节首页退出本章二极管阵列检测器DIODEARRAYDETECTOR本节首页退出本章四、液相色谱仪的使用1、流动相（2）溶剂要与检测器匹配。对于紫外吸收检测器，应注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长要长。所谓溶剂的紫外截止波长指当小于截止波长的辐射通过溶剂时，溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明的，它严重干扰组分的吸收测量。本节首页退出本章（3）高纯度。不纯的溶剂会引起基线不稳，或产生“伪峰”。（5）低粘度。常用的有丙酮、

7、乙醇、乙晴等。但粘度过于低的溶剂也不宜采用，例戊烷、乙醚等，它们易在色谱柱或检测器内形成气泡，影响分离。本节首页退出本章必须做!溶剂前处理过滤：0.45um或更小孔径滤膜目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。本节首页退出本章目的：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡气泡对测定的影响：1）柱流量不准；2）检测器基线波动脱气注意点：1）每天脱气；2）混合溶剂脱气时间不能过长必须做!溶剂前处理本节首页退出本章2、高压输液泵1.每次使用后要把泵中的缓冲液洗干净，防止盐的沉积，