生化药物制造工艺核酸药物

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1、核酸药物nucleicacidmedicine依据化学结构和组成分类：分四类核酸碱基及其衍生物1核苷及其衍生物2核苷酸及其衍生物3多核苷酸4依据结构特点及临床应用情况分类具有天然结构的核酸类物质如：肌苷、ATP、GTP、CTP、UTP、CoⅠ等来源：提取或发酵特点：毒副作用小自然结构碱基、核苷、核酸类结构的类似物如：巯嘌呤、阿糖胞苷、聚肌胞等来源：以核酸类物质为前体通过“化学法”或“酶法”进行半合成特点：毒性较大RNA的生产工业用RNA的提取RNA制备具有生物活性RNA的制备.1、工业用RNA的提取稀碱法酵母等1％NaOH裂解胞壁溶液HCL中和加热破坏酶冷却到1

2、0OC离心RNA溶液调pH2-2.5（接近RNApl）离心RNA沉淀浓盐法酵母等10％NaCL90OC提取离心上清液调pH2-2.5离心RNA沉淀2、具有生物活性RNA的制备从核糖核蛋白中分离RNA(1)乙醇沉淀法：核糖核蛋白溶于NaHCO3水相用含辛醇的氯仿去蛋白乙醇RNA沉淀(2)盐酸胍法：核糖核蛋白2～4盐酸胍38OC溶解冷却至0OC离心RNA沉淀DNA生产方法1.工业用DNA的提取核苷酸的制备水解法发酵法半合成法直接提取法.酶水解:DNA或RNA为原料制备5′－核苷酸常用的酶：橘青霉产生的5′－磷酸二酯酶橘青霉培养液压滤酶液【酶解】除菌体DNA溶液酶解液

3、加热、调pH9.0过滤DNA降解液【离子交换】吸附于氯型阴离子树脂分部洗脱脱氧核苷酸(dCMP、dAMP、dTMP、dGMP)RNA降解进一步分离戊糖核苷酸碱水解：可制备3’和2’－核苷酸发酵法生产核苷酸产氨短杆菌发酵生产肌苷酸（IMP）：腺嘌呤营养缺陷型嘌呤核苷酸生物合成途径和代谢调控R5PPRPPPRPP转酰胺酶PRAIMP分解腺嘌呤阻遏GMPAMPADPATP反馈抑制SAMPAMPADPATPXMPGMPGDPGTP鸟嘌呤PPGMPATPPRPPGTP次黄嘌呤鸟嘌呤GMPIMP积累的主要途径（前提）◆保证IMP合成路线畅通：保证关键酶PRPP转酰胺酶的活力

4、---解除腺嘌呤及衍生物的组遏和反馈抑制◆阻断IMP的去路：阻断SAMP合成阻断IMP的分解筛选获得缺乏SAMP合成酶的腺嘌呤缺陷菌株，提供亚适量的腺嘌呤。◆使积累的IMP渗透到细胞外：增大细胞膜通透性选育Mn2+不敏感的变异株发酵法生产核苷枯草芽孢杆菌嘌呤核苷酸合成途径SAMPAMPIMPGMPXMP345678黄嘌呤缺陷型（II）鸟嘌呤缺陷型（经诱变缺失4号酶）（III）鸟嘌呤缺陷型（经诱变缺失4号酶）腺嘌呤缺陷型（经诱变缺失6号或7号酶）AICARSAICARPRAPRPP21（一）（一）（一）（一）1：PRPP转酰胺酶2、7：SAMP裂解酶3：IMP脱氢

5、酶4：XMP氨化酶5：GMP还原酶6：SAMP合成酶8：AMP脱氢酶当培养基中提供限量腺嘌呤时Ⅰ积累IMP肌苷Ⅰ＋Ⅱ积累IMP肌苷Ⅲ积累XMP黄苷枯草杆菌的磷酸单酯酶活力很强ADP（Ⅰ）ThankYou!nucleicacidmedicine