气相色谱内标法测定食品中甜蜜素含量

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1、气相色谱内标法测定食品中甜蜜素含量甜蜜素是一种常用甜味剂，国标检测方法是气相色谱外标法，分离柱是不锈钢填充柱。以前，由于毛细管柱价格昂贵，使用的不是很普遍，而现在已经得到普遍使用，一般实验室都会配备，而使用填充柱的实验，却越来越少。本文探讨用毛细管柱内标法检测甜蜜素，使检测效率大大提高，节省大量时间，且准确率高。   甜蜜素化学名称为环己基氨基磺酸钠，于1937年发现，1950年开始生产应用。它是由环己胺和氯磺酸或氨基磺酸或三氧化硫反应后用NaOH处理，再重结晶制得的一种白色结晶粉末，在高甜度甜味剂中，甜度是最低的，甜度为蔗糖的30～80倍

2、。风味较自然，后苦不明显，热稳定性高，是不被人体吸收的低热能甜味剂。1969年曾因其致畸性的报道而被世界各国禁用，后来由于大量试验表明它并无致畸、致癌等作用，许多国家重又许可使用。我国于1987年开始应用甜蜜素，它是目前我国食品行业中应用最多的一种甜味剂。甜蜜素含量检测目前有气相色谱检测方法和液相色谱检测方法等。最经典的方法是GB/T5009.97-2003《食品中环己基氨基磺酸钠的测定》。但该方法是外标法，且用的是不锈钢填充柱，在没有自动进样器的条件下，要想定量准确，需要花很长时间。要准确地确定一个样品的甜蜜素含量，上机部分至少需要15-

3、～20分钟（要求：进样水平非常高的人），而用内标法只需5～10分钟（要求：一般操作者）。本文采用在提取溶剂正己烷中加入两种内标物质（甲苯和乙酸正丁酯）对甜蜜素经过衍生后的产物进行定量。   1.试验部分   1.1原理   在硫酸介质中甜蜜素与亚硝酸钠反应，生成环己醇亚硝酸酯，利用气相色谱法进行定性和定量。   1.2试剂（所用试剂不做说明皆为分析纯，水为蒸馏水）   1.2.1 甜蜜素储备溶液：称取1.0000g甜蜜素（含量≥99.0%），加水溶解并定容至100mL，此溶液浓度为10.00mg/mL，为储备液。置于4℃的冰箱中。本次试验溶

4、液浓度为：10.320mg/mL   1.2.2 甜蜜素标准使用溶液：取1.2.1储备液10mL，加水定容至100mL，为使用液，浓度为1.0000mg/mL。本次试验使用溶液浓度为：1.0320mg/mL   1.2.3 100g/L硫酸溶液：称取50g浓硫酸，用水定容至500mL。   1.2.4 50g/L亚硝酸钠溶液：称取25g亚硝酸钠，用水定容至500mL。   1.2.5 正己烷   1.2.6 甲苯(内标)   1.2.7乙酸丁酯（内标）   1.2.8 氯化钠   1.3仪器   1.3.1 岛津GC-14C气相色谱仪（带F

5、ID检测器、毛细管进样口、N2000色谱工作站）   1.3.2 DB-5毛细管柱（30m×0.32mm×0.25μm）或其它类型毛细管柱，如DB-1、DB-1701   1.3.3 离心机   1.3.4 10μL微量进样器   1.4仪器操作条件   1.4.1 检测器：200℃   1.4.2 汽化室：180℃   1.4.3 柱温：70℃   1.4.4载气流速（压力）：100kPa   1.4.5氢气流速（压力）：50kPa   1.4.6空气流速（压力）：60kPa   1.5样品前处理   1.5.1 内标溶液的配置：在正己烷

6、中加入一定量的内标（乙酸丁酯和甲苯）1，加入的量以出色谱峰合适为宜。一般为500mL正己烷中加入内标100μL～200μL。本次实验乙酸丁酯的浓度为0.1344mg/mL（称量0.0672g乙酸丁酯于装有10mL左右正己烷的25mL容量瓶中，再将溶液转移至500mL容量瓶中并定容至刻度线，摇匀，备用。   1.5.2 标准溶液前处理：吸取1.2.2标准溶液10mL于50mL比色管中，加10mL水，摇匀，置于冰浴中。加入5mL50g/L亚硝酸钠溶液，5mL100g/L硫酸溶液，在冰浴中放置30min，并时常摇动，然后准确加入10mL1.5.1

7、溶剂，5g氯化钠，摇匀后振摇80次。静置分层。吸出正己烷层于10mL带塞离心管中进行离心分层（如有机溶剂和水相很快就有分层或只要进样针能吸出提取的溶剂，就可以不需离心分离这一步骤），吸取正己烷层1μL注入色谱仪进行分析。算出校正因子2。   1.5.3 液体样品前处理：称取试样20.0g于50mL带塞比色管中，加10mL水。摇匀，置于冰浴中。处理过程同标准溶液前处理1.5.2。吸取正己烷层试样1μL注入色谱仪进行分析。   1.5.4 固体样品前处理：称取已磨碎（剪碎）试样2.0～10.0g（根据样品中甜蜜素含量而定称取质量，使甜蜜素的量在

8、1～10mg之间）于50mL带塞比色管中，加10mL水。一些样品不易溶解，如蜜饯类、山楂等，置于水浴锅中煮沸15min左右，冷却至60℃以下，置于冰浴中。处理过程同标准溶液前处理