高效液相色谱使用与维护

《高效液相色谱使用与维护》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、高效液相色谱的使用与维护浙江省疾病预防控制中心蔡增轩液相色谱仪器部件日常维护色谱图相关术语实验操作与应用一些商品化仪器agilentｄｉoｎeｘHPLC的环境设置：良好的接地专门房间定制台面不间断电源HPLC的日常操作条件：温度：10～30℃,最好是恒温；空调器相对湿度<80％,最好是恒湿;除湿机远离高电磁干扰、高振动设备;有良好的通风设施;通风罩高效液相色谱仪组成输液系统进样系统分离系统检测系统数据记录处理系统溶剂色谱泵自动进样器HPLC色谱柱检测器废液数据处理系统液相色谱流程图HPLC色谱泵自动进

2、样器色谱柱及柱温箱检测器数据处理系统溶剂液相色谱的流动相1.流动相特性（1）流动相（淋洗液，洗脱剂）：组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况；（2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。（3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。2.流动相类别按流动相组成分：单组分和多组分按极性分：极性、弱极性、非极性按使用方式分：等度洗脱和梯度洗脱常用溶剂己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙

3、酯、乙醇、乙腈、水。3.流动相选择在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。正相液-液分配分离：先选中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。常用溶剂的极性顺序：水(最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六环>四氢呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>异丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>环己烷>己烷>煤油(最小)高效液相色谱流动相溶剂的物化性质（部分）合适选择性溶剂液相色谱溶剂选择范围液相色谱流动相溶

4、剂的选择步骤：●选择具有合适物理性质的溶剂，如沸点、粘度、紫外截止波长等●选择合适洗脱强度的溶剂：简单样品，2≤k’≤5；复杂样品，0.5≤k’≤20●改变溶剂的选择性，使被分离组分具有较高的α值所有溶剂合适物理性质溶剂合适保留值溶剂液相色谱中的溶剂强度1.溶剂强度是描述色谱性能的主要指标，表示溶剂对样品的洗脱能力，它决定于溶剂与溶质之间分子的作用力。目前还没有一个统一标准描述不同类型液相色谱体系中的溶剂强度，而是采用相对极性和溶解度参数等作为溶剂强度指标。1)溶解度参数（参见溶剂选择性）2)极性参数P’根

5、据固定相和流动相的极性大小,人们把液相色谱分成：◆正相色谱：固定相极性大于流动相(包括硅胶吸附色谱)◆反相色谱：固定相极性小于流动相正相色谱：增加溶剂极性，保留时间增大或变小？反相色谱：增加溶剂极性，保留时间又如何变化？洗脱强度与溶剂极性分子之间相互作用有色散力、偶极作用、氢键和介电作用。某一溶质与其它分子相互作用大小的程度可以用极性大小表示。极性越大,它与其它分子的作用力越大。“极性”溶剂容易吸收和溶解“极性”物质。溶剂洗脱强度指流动相中溶剂的洗脱能力,它不仅与流动相，而且与固定相的极性有关。在正相色谱中,

6、“溶剂洗脱强度”与溶剂极性成正比；而在反相色谱中，溶剂极性越大,洗脱能力越小。溶剂强度图反相色谱THF/H2OACN/H2OMeOH/H2O020406080100正相色谱020406080100甲醇戊烷异丙基氯二氯甲烷乙醚乙腈00.150.30.450.60.75混合溶剂的极性在液相色谱中,一般溶剂的极性变化二个单位,溶质的分配比差不多能有十倍的变化。通过溶剂强度参数的计算,可以较好地较快地选择合适溶剂或调整流动相的极性范围。如：①正相色谱：k2’/k1’=exp[(P1’－P2’)/2]②反相色谱：k

7、2’/k1’=exp[(P2’－P1’)/2]在液相色谱常用混合溶剂作流动相。混合溶剂的P’具有加和性：P’ab=aP’a＋bP’b,为某一溶剂的体积分数。溶剂选择性分类一般地说,改变溶剂比例可调节流动相的极性,从而使得组分的容量因子落在合适的范围内。但由于分子间相互作用的类型相同,分离因子变化不大。因此专门研究了各种溶剂的选择性,并将常用溶剂进行分类。质子给予体偶极相互作用质子接受体溶剂选择性分类三角形图XeXdXn12345678纯质子接受体强偶极中性化合物纯质子给予体1组：脂肪醚（纯质子接受体）2

8、组：脂肪醇（质子接受-给予体）3组：吡啶衍生物、四氢呋喃（质子接受体，易极化）4组：乙二醇、苄醇、乙酸、甲酰胺（质子给予体）5组：二氯甲烷、二氯乙烷（大偶极距）6组：脂肪酮、酯、二氧六环、腈7组：芳烃、芳醚、硝基甲烷8组：氟代醇、氯仿、水（质子给予体）质子给予体偶极相互作用质子接受体反相色谱中的溶剂选择性1甲醇2TFH345乙腈67水8质子给予体偶极相互作用质子接受体正相色谱中的溶剂选择性醚1234