氢氧化钾蛋白质溶解度的测定

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1、氢氧化钾蛋白质溶解度的测定1、原理氢氧化钾蛋白质溶解度可以反映蛋白质变性的情况。不同的蛋白质品种，氢氧化钾蛋白质溶解度不同。蛋白质变性越大，氢氧化钾蛋白质溶解度越小。用一定浓度的氢氧化钾溶液提取试样中的可溶性蛋白质，在催化剂作用下用浓硫酸将提取液中可溶性蛋白质的氮转化为硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用盐酸滴定测出试样中可溶性蛋白质含量；同时，测定原始试样中粗蛋白质含量，计算出试样的蛋白溶解度。2、试剂a)  氢氧化钾（分析纯），无水硫酸钾、五水硫酸铜、氢氧化钠、硼酸、甲基红、溴甲酚绿、硫酸铵

2、；b)  浓硫酸、盐酸（分析纯）、95%乙醇、蒸馏水。3、仪器和设备a)  感量为0.0001g分析天平；b)  磁力搅拌器；c)  离心机（带离心管），转速为2700r/min以上；d)  样品粉碎机；e)  60目分析筛；f)  电炉；4g)  100mL或250mL凯氏烧瓶；h)  凯氏蒸馏装置；i)  250mL锥形瓶；j)  1000mL容量瓶；k)  微量滴定管。4、试剂的制备a）  0.2%氢氧化钾溶液称取2.440g氢氧化钾，加水溶解后，转移至1000mL容量瓶中，用水定容至刻度。b）  混合催

3、化剂称取6g硫酸钾和0.4g硫酸铜，磨碎混匀。c)  氢氧化钠溶液称取400g氢氧化钠，加水溶解后，转移至1000mL容量瓶中，用水定容至刻度。d)  硼酸溶液称取20g硼酸，加水溶解后，转移至1000mL容量瓶中，用水定容至刻度。e)  0.1M盐酸标准溶液量取8.3mL浓盐酸，注入1000mL水中混匀，按GB601-88要求进行标定即可。f)  混合指示剂称取1g甲基红和5g溴甲酚绿，加入乙醇溶解后，转移至10004mL容量瓶中，用乙醇定容至刻度。5、样品的制备取具有代表性的蛋白质样品，用四分法缩减分取20

4、0g左右，粉碎过60目筛，充分混匀，装入磨口瓶中备用。6、测定步骤称取蛋白样品1.0g，精确到0.1mg，置于250ml高型烧杯中，加入50.00ml氢氧化钾溶液，在磁力搅拌器上搅拌20min，将溶液转移至离心管中，以2700r/min离心10min，小心移取上清液15.00ml，放入消化管中，按照GB/T6432-1994凯氏定氮法测定试样中可溶性蛋白质的含量。同时，按照GB/T6432-1994凯氏定氮法测定同一试样中总的粗蛋白质含量。7、结果计算氢氧化钾蛋白质溶解度X按下式计算：X=W1/W2*100%式

5、中：W1—试样溶于氢氧化钾溶液中的粗蛋白质含量，%;W2—试样总的粗蛋白质含量（以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果），%。计算结果表示到小数点后一位。8、精密度a）重复性4在同一实验室，由同一操作人员完成的两个平行测定结果，相对偏差不大于2%；以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果。b)再现性在不同实验室，由不同操作人员用不同的仪器设备完成的两个测定结果，相对偏差不大于4%。4