GBT18086-2000 植物检疫烟霜霉病菌检疫鉴定方法 - 下载地址.pdf

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1、ca/T18086-2000前言烟霜霉病是我国进境植物检疫危险性病害，为了防止该病菌随寄主传人我国，在进境检疫时，需正确掌握烟霜霉病菌的检疫鉴定方法本标准在制定过程中，经过调查研究，分析有关资料和总结多年的实践经验，以及根据烟霜霉病菌的生物学特性、病理学原理，确定各项技术指标。本标准给出烟霜霉病病原菌的抱囊梗和抱囊及卵抱子的形态特征，两者可同时或单独作为烟霜霉病菌的鉴定依据。本标准的附录A是提示的附录，附录中的“冰冻匀浆法”是检验烟霜霉病菌卵抱子的一种较先进的方法，但目前在国内尚未普及，故在检验烟霜霉病菌时，若条件允许，也可采用此法检验该病原产生的卵抱子本标准由农业部提出

2、本标准负责起草单位:中华人民共和国广东出入境检验检疫局。本标准主要起草人:李怡珍、章正、钟国强、张传飞。中华人民共和国国家标准植物检疫cB/T18086---2000烟霜霉病菌检疫鉴定方法Plantquarantine-MethodsforinspectionandidentificationofPeronosporahyoscyamideBaryf.sp.tabacina(Adam)Skalichy1范围本标准规定了进境植物检疫中对烟霜霉病菌的检疫鉴定方法本标准适用于进境干烟叶和烟属植物种子、种苗的烟霜霉病菌检疫和鉴定。2原理烟霜霉病菌为专性寄生菌，烟叶被侵染为害后，出

3、现边缘模糊、褪绿的近圆形斑点，后期形成淡褐色可脱落的坏死病斑。在适宜温湿度条件下，叶背面病斑长出淡蓝色霉状物，即烟霜霉病菌的抱囊梗和袍囊;在一定条件下，病组织内可形成卵抱子。病原菌的寄生专化性及其形态学特征是鉴定烟霜霉病菌的依据。3仪器、试剂3.1手持扩大镜。3.2带光源的扩大镜。3.3双目解剖镜(lox-50x).3.4显微镜(10OX一100OX)。3.5离心机(1000r/min-4000r/min).3.6不锈钢筛(孔径60[=).3.7振荡器(200r/min),3.80.02mol/L磷酸缓冲液(pH=7)o3.9苯胺蓝。3.10乳酚油乳酚油配制:苯酚结晶(水

4、浴加热溶化)20mL、乳酸20mL、甘油40mL,蒸馏水20m工混合而成。3.111o%氢氧化钾溶液氢氧化钾溶液配制:取氢氧化钾10g，加水90mL溶解配成10%氢氧化钾溶液。4抽样4门抽查取样前查验待检烟叶的有关单证，核实产地、包装、啧头、品名、级别、收获年份及数量42用随机方法在货柜车、船舱、仓库堆位的上、中、下各层开件抽查，检查包内烟叶是否有可疑疫情随机在包内的各个部位取样，注意抽取等级差、叶色暗淡无光泽的烟叶带回室内检验4.3抽查件数国家质量技术监督局2000一04一26批准2000一，0一01实施cB/T18086-2000按货物批量总件数0.5%一10%开件抽

5、查取祥，500件以下的抽查20件，少于20件的全批抽查。其余开件抽查件数如表工:表1进境烟叶检疫抽杳表批量25件数，件抽查件数，件500以卜(含500了十)501-100021~301001-300031-403001-500041^507001一10000517010001以I-71-1004.4取样质量香料烟、打叶片烟每批取样6kg-15kg扎把烟每批取样20kg-40kge4.5烟属种子、种苗的抽样每批按2，件数的5Yo-20%抽查，种子每批取样检验20g-50g，种苗每批取样检验100株以上，少于10。株的全检。5烟叶检验方法5.1病叶检查在光线充足处，逐片检查烟

6、叶有无烟霜霉病的可疑症状，叶背有无灰褐色的霜霉层5.2病原菌检验5.2，直接镜检用解剖针挑取病斑上的霉状物制片镜检，用显微镜观察有无病原菌的泡囊梗和饱囊，记录其形态特征，必要时测量袍囊梗的长度和抱囊的大小。5.2.2洗涤检验将未发现霜霉层的可疑病斑及碎片，置250ml_三角瓶内，加人适量蒸馏水浸软后，用振荡器激烈震荡5min，洗下病斑表面的病原物，将洗涤液倒进离心管，以1000r/min离心5min,倾去上层清液，取沉淀液置载玻片上，盖上盖玻片，用显微镜检查有无烟霜霉病菌的抱囊梗和抱囊，每批样品至少检查10个玻片5.2.3叶组织透明法检验卵抱子选取病叶上霉状物稀少的老病斑

7、置于小烧杯中，加适量1000氢氧化钾溶液(或其他叶组织透明试剂)，煮沸5min-10min至叶组织透明，加。.05%苯胺蓝(棉蓝)乳酚油作浮载剂，置显微镜下逐片观察有无卵抱子5.2.4冰冻匀浆法检验卵抱子(见附录A)5.3样品的保存经检验完毕的大宗烟叶的样品，香料烟、打叶片烟等每批留样1kg-2kg，扎把烟每批留样2kg-4kg，注明烟样的合同号、产地、品名、级别、收获年份、抽样地点、时间等项目后分别存放于干燥、防虫处保存2个月。发现有烟霜霉病叶的样品，至少保存6个月，以备复检、谈判和仲裁。保存期满后需作灭菌处理6烟属植物的种