热原检查法（兔法）

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1、文件编号XXXXXXX/X总页数1编制者审核者编制日期审核日期fe（兔法）颁发部门执行日期批准者批准日期1・目的：建立产品中热原检查的标准操作规程。2•范围：产品的热原检查。3•责任：质量监督部。4.内容：本法适用于《中国药典（1995年版）》附录中“热原检查法—兔法”。4.i实验材料及用具：4.1.1天平:供试品称量用试剂称量用家兔称重用°Co°Co精度o.rco精度0.01或0.lmg精度0.1或lmg精度10g4.1.2电热干燥箱：（50-300±1）4.1.3恒温水浴：（37-100±0.5）4.1.4热原测温仪或肛门体温计，4.

2、1.5家兔固定盒：盒的两侧有通气孔。4.1.6实验用具：注射器、烧杯、三角瓶、大称量瓶、吸管、移液管、表面皿、玻璃棒、广口试剂瓶、金属制密封器（均需去热原）、时钟、直蹑、脱脂棉或细软卫生纸。4.1.7试剂：75%乙醇、凡士林或50%甘油、新蒸憎水（4小时内蒸憎）、灭菌注射用水（经热原检查，3只家兔中体温升高0・4°C的最多只有1只，且3只家兔体温升高总数低于1°C,或经细菌内毒素检查，含细菌内毒素低于0.5EU/U11）、无热原氯化钠（经250°C30分钟或200°C1小时或180°C2小时加热除热原）。4・2溶液配制：供试品溶液。4.2

3、.1原料药：4.2.1.1精密称取适量，置烧怀、三角瓶或称量瓶中。4.2.1.2按规定浓度，加精密量取的一定量灭菌注射用水，搅拌使溶解。4.2.2注射液：4.2.2.1用75%乙醇棉球消毒安瓶颈部，割开安瓶。4.2.2.2精密量取一定量药液。4.2.2.3按规定浓度，加精密量取的一定量灭菌注射用水，混匀。4.2.3注射用生理盐水：4.2.3.1称取无热原的氯化钠适量至烧杯或三角瓶中。4.2.3.2加入供试品“注射用水”适量，配成0.9%的等渗溶液。4.3实验动物：4.3.1健康无伤、体重1.7-3.0kg、同一来源、同一品系家兔，雌兔应无

4、孕，一兔一笼，标兔号。4.3.2新兔预选：4.3.2.1新兔经饲养7日后，进行预测体温，测温的条件与热原检查要求相同。4.3.2.2测量体温时，测温仪探头或肛门计插入肛门的深度各兔应相同约6cm,测温时间不得少于1.5分钟。4.3.2.3每1小时测温一次，共4次。4.3.2.44次体温均在38.0-39.6°C（一般多选用38.4-39.4°C）的范围内，且温度最高最低差数不超过0・4°C（以不超过0・35°C为佳）的家兔，可供3周内实验用。4.3.2.5录选新兔编号、登记入兔史记录卡，未被录选家兔，可饲养7日再予测体温1次，如仍不符合耍

5、求则淘汰。4.3.3家兔的重复使用：4.3.3.1供试品判定为符合规定的家兔，至少应休息2H,方可供下一次实验用。4.3.3.2供试品判定为需重复实验的家兔，应暂做休息处理，如重复合格，升温20.6°C的家兔，应重新测温挑选。4.3.3.3供试品判定为不符合规定的家兔，一般不再使用。如其组内家兔平均升温未达0.8°C且已休息两周以上，可重新测体温，合格者可用。4.3.3.4每一家兔的使用次数，最多为10次，体重逐渐减轻或超过3.0kg的家兔，不再使用。4.3.4复试用家兔:挑选体重在2.0-2.4kg、正常体温在38.8-39.2°C、使

6、用过2-3次的家兔进行试验。4.4试验前的准备4.4.1测温仪或肛门温度计每3-6个月校验一次，不符合耍求者不能使用。4.4.2用具的除热原：清洗干净的玻璃器皿、注射器、针头、直锡等放入金属制容器内，密闭，置电热干燥箱中经250°C30分钟或200°C1时或180°C2小时加热除热原。去除热原未曾开启的密封容器内用具，可供一周内使用。4.4.3实验室的温度：4.4.3.1实验室的温度应在17-28°C范围内。4.4.3.2实验室与饲养室的温度相差不得大于5°Co4.4.3.3试验全过程中，室温变化不得大于3°C。4.5检查法：4.5.1选

7、符合规定的家兔，停止给饲料和水，称重后置于家兔固定盒内至少1小时。4.5.2每隔30分钟或1小时测量家兔体温1次，一般测量2次，两次体温之差不得超过0.2°C,以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温。4.5.3当日使用的家兔，正常体温应在38.2-39.6°C范围内，且各兔间查差不得超过1°C。4.5.4每个供试样品用家兔3只，再测定正常体温后15分钟内给药。4.5.4.1供试品的剂量，应按该药项下的规定注射，未规定剂量的药品，可根据该药的夯理性质，在不影响家兔止常生理的前提下,按体重计算（人按50kg计），用临床一次剂量的3-10倍。4

8、.5.4.2供试品注射的体积，按家兔体重每kg不少于lml,不大于10mlo体积在5-10ml/kg的溶液应在37-38°C预热后注射。4.5.4.3供试品配制完毕后，应在30分钟内注射于家兔