一株产淀粉酶海洋放线菌的分离与鉴定【开题报告+文献综述+毕业论文】

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1、本科毕业论文开题报告生物科学一株产淀粉酶海洋放线菌的分离与鉴定一、综述本课题国内外研究动态，说明选题的依据和意义淀粉酶是能够催化淀粉水解转化成葡萄糖、麦芽糖及其它低聚糖的一群酶的总称，它广泛存在于动植物和微生物中。如今淀粉酶在酶市场销售中占据了约25%的比例。它在制糖，纺织、造纸、发酵、烘烤、蒸馏等工业中发挥着重要的作用，此外它也可作为促消化剂运用于食品、医药工业。淀粉酶的巨大潜力使其在当今社会中的需求量日益提高。因此，如何获得高产量、高活性的淀粉酶显得至关重要。而对于该菌株的分离与鉴定并对其归类以及对其性质的进一步了解均是必不可少的。为更加全面的掌握所获得的菌株的特征

2、并将其更好的应用于实践奠定基础。细菌分离是指通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物的过程。目前实验室用固体培养基获得微生物纯培养的方法主要有涂布平板法、稀释倒平板法、平板划线法。由于将含菌材料先加到还较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，而且采用稀释倒平板法也会使一些严格好养菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中更常有的菌种分离方法是涂布平板法。涂布平板法是先将已熔化的培养基倒入无菌培养皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面，再用无菌涂布棒将菌液均匀分散至整个平板表面，经培养后挑取单

3、个菌落。平板划线法是指用接种环以无菌操作蘸取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。细菌鉴定是指将分离培养获得的菌体,通过纯化培养使其达到不含有其他微生物的纯培养程度,继而进行系统鉴定。系统鉴定是通过细菌的形态结构、生长特性、抗原性、病原性以及目前流行的核酸测定方法等检测,并用已知标准免疫血清确定分离细菌的属、种和型(群)。目前常用的细菌鉴定方法主要有形态学鉴定、生理生化特征及碳源利用、分子生物学鉴定。菌落形

4、态学鉴定,主要观察菌落在其适合的培养基上的生长状况。采用平板插片法在光学显微镜下观察菌株的形态特征，包括菌丝、孢子丝、孢子产生的时间，以及它们的着生方式和形态特征。观察试验菌在形态学鉴定培养基上的生长情况，例如基内菌丝、气生菌丝的颜色及分布情况以及可溶性色素的有无及颜色。生理生化鉴定主要通过观察试验菌在明胶液化培养基、牛奶凝固胨化培养基、黑色素产生培养基、硫化氢产生培养基、纤维素生长培养基、硝酸盐还原等培养基上的生长情况及现象。碳源利用主要是通过测定其对木糖、阿拉伯糖、麦芽糖、蔗糖、甘露糖、葡萄糖、肌醇、山梨醇、乳糖、果糖、L-鼠李糖等糖的利用情况来判断其碳源的利用情况

5、。从而能够得出细菌的鉴定结果。分子生物学鉴定目前比较流行的主要是核酸检测技术,包括基因测序、指纹图谱技术、基因探针技术、聚合酶链反应(PCR)、GC含量测定等。PCR和核酸杂交单独或结合仪器已经形成比较经典的核酸检测技术,目前这两者已经得到了较大范围的推广和应用。PCR技术快速敏感、简便易行，其原理为：DNA双链分子经过热变性后，分解成两条单链分子；温度降至一定程度后引物与单链DNA分子结合；然后DNA聚合酶以DNA单链为模板，并利用反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸，从引物向后延伸合成新的DNA互补链。反应可以周而复始，使目标DNA序列得到迅速大量的扩增。PCR反应有两

6、个特点：①目的性强，反应所需要的引物是专门设计的，具有很高的特异性。②目标DNA的拷贝数量大。16SrRNA基因序列分析的主要方法有两种：一种是16SrRNA提纯后用反转录酶和保守引物进行测序。另一种是扩增16SrRNA基因为16SrDNA，然后与特定的质粒连接进行克隆测序或用PCR产物直接测序。16SrRNA序列分析方法目前应用比较普遍，这种方法结果比较准确，可信度较高，且16SrRNA序列信息与相关软件均免费开放，查找应用十分方便，是研究细菌系统发育、建立自然分类系统的主要依据之一，其在分类学中的地位是无法代替的。一般来说，对于微生物的检测或鉴定应当至少使用三种指标

7、同时进行验证。传统的分类鉴定需要测定的项目众多，工作程序繁琐，耗时长。在某些时候可以配合分子生物学的方法进行鉴定。市场上的微生物自动鉴定系统虽然基本上都通过了相关权威组织的认可，在细菌快速鉴定或初步鉴定中起到了一定的作用，但其稳定性尚存在一定问题，同样需要配合其他方法来相互印证，从而完成细菌鉴定工作。二、研究的基本内容，拟解决的主要问题：本实验通过对产淀粉酶海洋放线菌菌株进行形态观察，并辅以各种培养基进行生理生化试验及碳源利用对待测菌株进行了传统鉴定。又通过DNA提取，PCR扩增、16SrDNA的克隆、Amp抗性培养基对阳性克隆的初步筛选