cho细胞株开发技术策略探讨

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1、CHO细胞株开发技术策略探讨陶维红，秦民民，张哲如上海津曼特生物科技有限公司，上海201210摘要:主要介绍了单克隆抗体药物工业生产中宿主细胞选择、表达载体构建、转染方法、筛选技术、细胞培养工艺技术方法以及最后选定细胞株的标准等，结合单抗药物CHO细胞株开发和培养工艺的经验，对当前我国单抗CHO细胞株开发技术策略进行了探讨。关键词:单克隆抗体;CHO细胞;细胞株开发;培养工艺DOI:10．3969/j．issn．2095-2341．2014．06．03StrategyDiscussionforCHOCellLineDevelopmentTAOWei-hong，QIN

2、Min-min，ZHANGZhe-ruShanghaiJMT-BioScience＆TechnologyCo．Lt．，Shanghai201210，ChinaAbstract:Severalstrategiesforindustrialproductionofmonoclonalantibodydrugwereintroducedinthispaper，includinghostcellselection，constructionofexpressionvector，transfectionmethod，screeningtechniques，cellculture

3、technologyaswellasthestandardmethodoffinalcelllinesselection．OnthebasisoftheprogressofmonoclonalantibodydrugCHOcelllinedevelopmentandcellcultureprocess，currentstrategyforthedevelopmentofCHOcelllinesinmonoclonalantibodytechnologywerealsodiscussed．Keywords:monoclonalantibody;CHOcell;cell

4、linedevelopment;cellcultureprocess20世纪80年代初，基因重组技术开始应用于动物细胞。1984年，Genentech公司首次实现重组中国仓鼠卵巢(Chinesehamsterovary，CHO)细胞表达组织型纤溶酶原激活剂(tissuetypeplas-minogenactivator，t-PA)，标志着哺乳动物细胞表达系统的建立［1］。随后，许多外源蛋白基因相继被转染到哺乳动物细胞，一些有价值的蛋白不断实现表达，包括凝血因子、促红细胞生成素(eryth-ropoietin，EPO)、免疫球蛋白、尿激酶(urokinase，UK)、

5、乙肝表面抗原(HBsAg)和单克隆抗体［2］等。近几年，平均每年有15种以上重组蛋白新药通过美国食品和药物管理局(FDA)批准［3］，并且几个重磅生物抗体药专利即将到期促使生物仿制药的出现，全球生物抗体药销售额已超过1200亿美元/年［4］，预计到2015年，全球生物抗体药销售额将超过1500亿美元［5］。最突出的重磅炸弹级药物包括:美罗华利妥昔单抗［Ｒituximab(Ｒitaxan)，美国Genentech和BiogenIdec公司研制］、赫赛汀曲妥珠单抗［Trastuzumab(Herceptin)，美国Genentech公司研制］、阿伐斯汀贝伐单抗［Bev-

6、acizumab(Avastin)，美国Genentech公司研制］、艾比特思西妥昔单抗［Cetuximab(Erbitux)，美国Im-Clone公司和Bristol-MyersSquibb公司研制］和修美乐阿木达单抗［adalimumab(Humira)，美国Cambridge抗体公司和AbboＲ公司研制］，这几种单抗药物在2011年全球销售额分别都在近50亿美元以上［6］。在国内，生产单抗药物的上市公司目前仅仅有上海的中信国建、赛金和北京的百泰，国内市场空间巨大，很多从事小分子药物或者中药的企业已经进军单抗药物领域，包括海正药业、复星医药、荣昌制药、丽珠药业和

7、沃森药业等。最近几年，单抗药物领域中小型企业也应运而生，其收稿日期:2014-10-30;接受日期:2014-11-02基金项目:上海市科学技术委员会“科技型中小企业技术创新资金”项目(1402H195100)资助。作者简介:陶维红，工程师，硕士，主要从事CHO细胞株开发和细胞培养工艺开发研究。E-mail:taoweihong123@163．com殯陶维红，等:CHO细胞株开发技术策略探讨395中不具备单抗药物研发平台的企业在初始阶段会考虑技术外包，于是药明康德、睿智化学等生物医DHFＲ体系。GS(谷氨酰胺合成酶)扩增系统，以CHO-K1为宿主细胞，是近些年发