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1、UTI抑制骨肉瘤细胞侵袭及转移实验探究作者：张衣北，陈安民，郭风劲【摘要】目的体外研究尿胰蛋白酶抑制剂(urinarytrypsininhibitor,UTI)抑制人骨肉瘤细胞系MG63细胞的侵袭与转移。方法在体外培养的MG63细胞培养基中加入不同浓度的UTI,对照组中加入50U1PBS缓冲液，用免疫组化、RTPCR和Westernblot方法检测尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinasetypeplasminogenactivator,UPA)的表达情况。结果免疫组化染色、RTPCR及Westernblot检测发现随着UTI浓度的逐渐
2、增加，UPA表达量逐渐减少，当UTI浓度增加到100nM时,抑制作用明显(P<；0.05),并且呈剂量依赖性。结论UTI不但从mRNA水平，而且从蛋白质水平抑制骨肉瘤细胞表达UPA,从而抑制骨肉瘤细胞侵袭与转移。【关键词】尿胰蛋白酶抑制剂；尿激酶型纤溶酶原激活物；骨肉瘤ExperimentalStudyontheSuppressionoftheInvasionandMetastasisofOsteosarcomabyUTIDepartmentofOrthopedics,TongjiHospitai,TongjiMedicalColl
3、ege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430030,ChinaAbstract:ObjectiveInordertoinvestigatetheeffectofinvasionandmetastasisofhumanosteosarcomaMG63bytheurinarytrypsininhibitor(UTI)invitro.MethodsDifferentdoses(10、50、100、300、500nM)ofUTIwereaddedintothehumanosteosa
4、rcomaMG63mediumand50u1PBSwasaddedintothecontrolatthesametime,thentheexpressionofurokinasetypeplasminogenactivator(UPA)wasdetectedbyimmunohistochemistry,RTPCRandWesternblot.ResuItsThemoreconcentrationofUTIwastransfected,thelesserUPAwereexpressedbythedetectionsofimmunohist
5、ochemistryandRTPCRandWesternblot.Whentheconcentrationbecame50nM,thesuppressionwasobvious(P<；0.05),andthesuppressionwasindosedependentmanners.ConclusiontheexpressionofandattheproteinTheUTIcansuppressefficientlyproteinUPAbothatthemRNAlevelosteosarcomacells.level,thensupp
6、resstheinvasionandmetastasisinKeywords：Urinarytrypsininhibitor；Urokinasetypeplasminogenactivator；Osteosarcoma骨肉瘤是一种恶性度高和破坏性强的肿瘤，常在早期就发生侵袭与转移。在这种复杂且多步骤的侵袭与转移过程中，肿瘤细胞水解细胞外基质是一个非常关键的步骤，有一系列蛋白酶的参与［1］。在这些蛋白酶中，以尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinasetypeplasminogenactivator,UPA)尤为重要［2］。因此，如何减少肿
7、瘤细胞产生UPA,对抑制肿瘤的侵袭与转移具有十分重要的意义。1材料与方法1.1主要实验材料与仪器人骨肉瘤细胞系MG63由武汉大学生命科学院提供；SP试剂盒和AEC显色试剂盒购自武汉博士德生物技术有限公司；RTPCR试剂盒和Westernblot检测试剂盒购自Fermentas公司，DMEM培养基及新生小牛血清购自美国GibcoBRL公司；UPA多克隆抗体和UTI购自Sigma公司。1.2实验方法1.2.1细胞培养传代后的人骨肉瘤细胞系MG63接种于含10%新生小牛血清的DMEM培养液中，分别加入不同浓度(10、50、100、300、50
8、0nM)的UTI,而空白对照组加入50u1PBS缓冲液。在371、5%C02、95%湿度下培养24h,然后分别收集培养液及细胞检测。1.2.2免疫组化染色用4%多聚甲醛固定实验组和对照组细胞爬片，然后用SP
